如何提高外源基因片段在原核细胞中的表达量
构建载体的时候,考虑用具有强启动子的载体并且能够在大肠杆菌中表达重组蛋白的载体,比如pET系列的载体,转入的宿主菌要求是表达形的,比如BL21等。在表达过程中,注意摸索诱导剂IPTG的量、诱导时间及培养温度。多次摸索就可以找到一个最佳方案,因为蛋白表达是一个载体+宿主菌+培养条件的优化组合的选取。你有可能还要考虑蛋白是否会形成包涵体,用什么样的柱子纯化。本人觉得主要是在诱导和温度培养是影响比较大,多设几组对照看哪一组表达量高。祝你好运!
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第1个回答 2010-11-23
在外源基因前面连一个强启动子,然后转到宿主中去,这是常见的做法。本回答被提问者采纳