请问过氧化氢酶测定公式中As1和As2到底代哪个数值啊？测定方法中说是一分钟测一次，共测4次，那么4个值咋代入公式中呢？？？
这样应该可以了吧
一、实验目的：
（1）掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。
（2）了解酶在提取过程中的两个参数：回收率、纯化倍数。
（3）掌握离心机的使用。
二、实验原理:
邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。
三、实验试剂：
大蒜、冷丙酮、磷酸缓冲液（PH7.8，0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液、邻苯三酚、浓盐酸、天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管 8个、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶8个、玻璃棒8根、试剂瓶250mL 3个、500mL 3个、250mL烧杯16个、试管带胶塞80根、移液管各5根
四、实验步骤：
（1）SOD提取：
称取5g大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞，加入15mL的PH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，得上清液。(留出1mL备用，准确量取剩余上清液体积，记录)
（2）除杂蛋白：
提取液加入1/4体积的氯仿-乙醇混合液搅拌10min，6000rpm离心15min去沉淀，得粗酶液。（取1mL粗酶液备用,精确测量剩余粗酶液体积）
（3）SOD酶的沉淀分离：
剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000rpm离心15min，得到SOD酶沉淀。将沉淀先加2mL磷酸缓冲液，溶解后再加3mL混匀。6000rpm离心15min，取上清得到SOD酶液。取1mL备用，其余量取体积。
（4）粗酶液活性测定：
提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测，具体步骤如下。
加入邻苯三酚后迅速混匀，准确计时4min，加一滴浓盐酸停止反应，420nm测吸光值。
试剂/（mL）
空白管
对照管OD1
提取液OD2
粗酶液OD2
酶液OD2
PH8.3缓冲液
3
3
3
3
3
SOD提取液
0
0
0.1
0.1
0.1
蒸馏水
2
1.8
1.7
1.7
1.7
室温放置20min
邻苯三酚
0
0.2
0.2
0.2
0.2
（5）溶液中可溶性蛋白含量测定：
分别从1mL备用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3mL按以下倍数稀释，260nm/280nm测定吸光值，按公式计算蛋白质浓度。
提取液稀释：50 ×
粗酶液稀释：20 ×
酶液稀释：10 ×
五、实验数据：
提取液
粗酶液
酶液
总体积（ml）
提取液
粗酶液
酶液
260nm吸光度值
280nm吸光度值
公式
蛋白质浓度(mg/ml)=(1.45A280－ 0.74A260) ×稀释倍数
蛋白质浓度（mg/ml）
对照管（OD1）
提取液（OD2）
粗酶液（OD2）
酶液（OD2）
420nm吸光值
六、实验结果及数据处理：
（1）酶活力单位
提取液酶活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
粗酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
（2）总活力
提取液总活力U=活力单位×总体积=
粗酶液总活力=活力单位×总体积=
酶液总活力=活力单位×总体积=
（3）比活力
提取液酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
粗酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
（4）纯化倍数
粗酶液纯化倍数=粗酶液比活力/提取液比活力=
酶液纯化倍数=酶液比活力/提取液比活力=
（5）回收率
粗酶液回收率=粗酶液总活力/提取液总活力=
酶液回收率=酶液总活力/提取液总活力=
七、实验结果误差分析：
（1）研磨和离心大概还不够充分。
（2）由于测量仪器的精密度引起的误差。
（3）在操作的过程中，加入邻苯三酚后未混合均匀，可能致使化学反应进行得不很充分，这可能是造成实验数据与预期不符的一个原因；
（4）在实验过程中，所需化学试剂加入的量不是很准确，这可能是实验数据出现问题的另一个原因；
（5）此外，实验本身还很粗糙，酶的提取、分离和纯化都不能十分彻底，还有很多杂蛋白干扰实验。
一、实验目的：
（1）掌握SOD酶的提取、分离、检测一般步骤。
（2）了解酶在提取过程中的两个参数：回收率、纯化倍数。
（3）掌握离心机的使用。
二、实验原理:
邻苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出O2-，生成带色的中间产物，中间物的积累在滞留30～45s后，与时间成线性关系，一般线性时间维持在4min的范围内，中间物在420nm波长处有强烈光吸收。当有SOD存在时，由于它能催化O2-与H+结合生成O2和H2O2，从而阻止了中间产物的积累，因此，通过测定光吸收即可求出SOD的酶活性。
三、实验试剂：
大蒜、冷丙酮、磷酸缓冲液（PH7.8，0.05mol/L)、氯仿-乙醇混合液、邻苯三酚、浓盐酸、天平、石英砂、研钵、冷冻离心机、50mL离心管 8个、紫外-可见分光光度计、250mL三角瓶8个、玻璃棒8根、试剂瓶250mL 3个、500mL 3个、250mL烧杯16个、试管带胶塞80根、移液管各5根
四、实验步骤：
（1）SOD提取：
称取5g大蒜蒜瓣，加入石英砂研磨破碎细胞，加入15mL的PH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，得上清液。(留出1mL备用，准确量取剩余上清液体积，记录)
（2）除杂蛋白：
提取液加入1/4体积的氯仿-乙醇混合液搅拌10min，6000rpm离心15min去沉淀，得粗酶液。（取1mL粗酶液备用,精确测量剩余粗酶液体积）
（3）SOD酶的沉淀分离：
剩余的粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000rpm离心15min，得到SOD酶沉淀。将沉淀先加2mL磷酸缓冲液，溶解后再加3mL混匀。6000rpm离心15min，取上清得到SOD酶液。取1mL备用，其余量取体积。
（4）粗酶液活性测定：
提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测，具体步骤如下。
加入邻苯三酚后迅速混匀，准确计时4min，加一滴浓盐酸停止反应，420nm测吸光值。
试剂/（mL）
空白管
对照管OD1
提取液OD2
粗酶液OD2
酶液OD2
PH8.3缓冲液
3
3
3
3
3
SOD提取液
0
0
0.1
0.1
0.1
蒸馏水
2
1.8
1.7
1.7
1.7
室温放置20min
邻苯三酚
0
0.2
0.2
0.2
0.2
（5）溶液中可溶性蛋白含量测定：
分别从1mL备用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3mL按以下倍数稀释，260nm/280nm测定吸光值，按公式计算蛋白质浓度。
提取液稀释：50 ×
粗酶液稀释：20 ×
酶液稀释：10 ×
五、实验数据：
提取液
粗酶液
酶液
总体积（ml）
提取液
粗酶液
酶液
260nm吸光度值
280nm吸光度值
公式
蛋白质浓度(mg/ml)=(1.45A280－ 0.74A260) ×稀释倍数
蛋白质浓度（mg/ml）
对照管（OD1）
提取液（OD2）
粗酶液（OD2）
酶液（OD2）
420nm吸光值
六、实验结果及数据处理：
（1）酶活力单位
提取液酶活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
粗酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
酶液活力单位：=2（OD1-OD2）×5/0.1=
（2）总活力
提取液总活力U=活力单位×总体积=
粗酶液总活力=活力单位×总体积=
酶液总活力=活力单位×总体积=
（3）比活力
提取液酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
粗酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
酶液比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度=
（4）纯化倍数
粗酶液纯化倍数=粗酶液比活力/提取液比活力=
酶液纯化倍数=酶液比活力/提取液比活力=
（5）回收率
粗酶液回收率=粗酶液总活力/提取液总活力=
酶液回收率=酶液总活力/提取液总活力=
七、实验结果误差分析：
（1）研磨和离心大概还不够充分。
（2）由于测量仪器的精密度引起的误差。
（3）在操作的过程中，加入邻苯三酚后未混合均匀，可能致使化学反应进行得不很充分，这可能是造成实验数据与预期不符的一个原因；
（4）在实验过程中，所需化学试剂加入的量不是很准确，这可能是实验数据出现问题的另一个原因；
（5）此外，实验本身还很粗糙，酶的提取、分离和纯化都不能十分彻底，还有很多杂蛋白干扰实验。
温馨提示：答案为网友推荐，仅供参考
第1个回答 2019-07-25
过氧化氢酶的活性测定——紫外吸收法
【原理】
h2o2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(a240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与用具】
紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；
【试剂】
0.2mol/l
ph7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；
0.1mol/l
h2o2（用0.1mol/l高锰酸钾标定）。
【方法】
1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml
4℃下预冷的ph7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。
2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。
表40-2
紫外吸收法测定h2o2样品液配置表
管
号
s1
s2
s3
粗酶液(ml)
0.2
0.2
0.2
ph7.8磷酸(ml)
1.5
1.5
1.5
蒸馏水(ml)
1.0
1.0
1.0
25℃预热后,逐管加入0.3ml
0.1mol/l的h2o2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。
3.结果计算：
以1min内a240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。
过氧化氢酶活性(u/gfw/min)=
式中
a240
=
as0－
as0—加入煮死酶液的对照管吸光值；
as1,
as2—样品管吸光值；
vt—粗酶提取液总体积（ml）；
v1—测定用粗酶液体积（ml）；
fw—样品鲜重（g）；
0.1—a240每下降0.1为1个酶活单位（u）；
t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。
【原理】
h2o2在240nm波长下有强烈吸收，过氧化氢酶能分解过氧化氢，使反应溶液吸光度(a240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。
【仪器与用具】
紫外分光光度计；离心机；研钵；250ml容量瓶1个；0.5ml刻度吸管2支，2ml刻度吸管1支；10ml试管3支；恒温水浴；
【试剂】
0.2mol/l
ph7.8磷酸缓冲液（内含1%聚乙烯吡咯烷酮）；
0.1mol/l
h2o2（用0.1mol/l高锰酸钾标定）。
【方法】
1.酶液提取：称取新鲜小麦叶片或其它植物组织0.5g置研钵中，加入2～3ml
4℃下预冷的ph7.0磷酸缓冲液和少量石英砂研磨成匀浆后，转入25ml容量瓶中，并用缓冲液冲洗研钵数次，合并冲洗液，并定容到刻度。混合均匀将量瓶置5℃冰箱中静置10min，取上部澄清液在4000rpm下离心15min，上清液即为过氧化氢酶粗提液。5℃下保存备用。
2.测定：取10ml试管3支，其中2支为样品测定管，1支为空白管，按表40-2顺序加入试剂。
表40-2
紫外吸收法测定h2o2样品液配置表
管
号
s1
s2
s3
粗酶液(ml)
0.2
0.2
0.2
ph7.8磷酸(ml)
1.5
1.5
1.5
蒸馏水(ml)
1.0
1.0
1.0
25℃预热后,逐管加入0.3ml
0.1mol/l的h2o2，每加完一管立即记时，并迅速倒入石英比色杯中，240nm下测定吸光度，每隔1min读数1次，共测4min，待3支管全部测定完后，按下式计算酶活性。
3.结果计算：
以1min内a240减少0.1的酶量为1个酶活单位（u）。
过氧化氢酶活性(u/gfw/min)=
式中
a240
=
as0－
as0—加入煮死酶液的对照管吸光值；
as1,
as2—样品管吸光值；
vt—粗酶提取液总体积（ml）；
v1—测定用粗酶液体积（ml）；
fw—样品鲜重（g）；
0.1—a240每下降0.1为1个酶活单位（u）；
t—加过氧化氢到最后一次读数时间（min）。
第2个回答 2010-11-16
看你的问题，好像是用的比色法连续测定，根据吸光值的变化，求酶活力。
每分钟测定一次，共测四分钟，得到四个吸光值，可以根据四个吸光值求得△A的值，将此值代入计算式即可。
每分钟测定一次，共测四分钟，得到四个吸光值，可以根据四个吸光值求得△A的值，将此值代入计算式即可。
第3个回答 2010-11-06
你们用的是什么方法测定的啊？我们做的是用高锰酸钾滴定法诶。
