如题所述
要得到基因的原核表达蛋白，先要考虑表达的载体，pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统，已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。一般的pET载体是先在不含DE3片段的菌株中进行克隆筛选，之后再把阳性克隆转化进入表达菌株，如BL21
DE3中，通过IPTG诱导进
行表达。通过扩大培养的体积获得更多的代谢产物。
因为原核表达系统也就是大肠杆菌不具备分泌的能力，要得到原核表达蛋白需要裂解菌体。因为是要用来免疫动物得到抗体，所以不需要考虑是否可溶表达，即使是包涵体表达的蛋白也能用来免疫动物。考虑到免疫动物时越高纯度的抗原效果越好。所以需要将表达蛋白分离纯化得到较高纯度的抗原。
免疫动物时需要考虑抗原与免疫动物的种属差异越远越好。抗血清量的需要，大动物如马、骡等可获得大量血清，抗体需要不多时，选用家兔或豚鼠就可以了。免疫原合适剂量的选定应考虑抗原性强弱、分子量大小和免疫时间。免疫注射的途径也很重要。一般采用多点注射，一只动物注射总数约为10点左右。免疫间隔时间也是重要因素，特别是首次与第二次之间更应注意。第一次免疫后，因动物机体正处于识别抗原和b细胞增殖阶段，如很快接着第二次注入抗原，极易造成免疫抑制。
DE3中，通过IPTG诱导进
行表达。通过扩大培养的体积获得更多的代谢产物。
因为原核表达系统也就是大肠杆菌不具备分泌的能力，要得到原核表达蛋白需要裂解菌体。因为是要用来免疫动物得到抗体，所以不需要考虑是否可溶表达，即使是包涵体表达的蛋白也能用来免疫动物。考虑到免疫动物时越高纯度的抗原效果越好。所以需要将表达蛋白分离纯化得到较高纯度的抗原。
免疫动物时需要考虑抗原与免疫动物的种属差异越远越好。抗血清量的需要，大动物如马、骡等可获得大量血清，抗体需要不多时，选用家兔或豚鼠就可以了。免疫原合适剂量的选定应考虑抗原性强弱、分子量大小和免疫时间。免疫注射的途径也很重要。一般采用多点注射，一只动物注射总数约为10点左右。免疫间隔时间也是重要因素，特别是首次与第二次之间更应注意。第一次免疫后，因动物机体正处于识别抗原和b细胞增殖阶段，如很快接着第二次注入抗原，极易造成免疫抑制。
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