各位同仁，我做的SYBR GREEN实时定量PCR，怎么阴性对照总是出来Ct值呢，我的阴性对照是用灭菌水做模板的

如题所述

推荐答案 2013-02-28

主要看你的CT值大约是多少，如果很大（大于40循环）那么可以判定结果没有问题，如果跟目的基因的CT一致或者为其他CT值那么判断为模板造成的气溶胶污染或者其他外缘DNA造成的污染。另外你阴性对照加的是水，那么说明你做梯度稀释的时候用的也是灭菌水，这个做荧光定量试验是很不规范的，建议用专门的荧光定量稀释液去做。

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其他回答

第1个回答 2013-03-01

主要是看您的CT值约大（大于40次），然后就可以判定结果没有问题，如果与靶基因的CT值相一致？？其他CT判断为模板，造成气溶胶污染或其他的东西边缘DNA造成污染。阴性对照加水，然后当你连续稀释无菌水，这是非常不规则的荧光定量测试，建议做一个特殊的荧光定量稀释。

第2个回答 2013-04-15

是不可能的，因为靶基因的CT值过大，导致在CT值的系列稀释液不按比例增加，所以是不好的扩增效率。

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