为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后，酶切鉴定正确，而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢？着急

因为 转化过程你没出来好 加点 kml 再转化 提质后 分别切2 这样就正确了来自：求助得到的回答

不管酶切还是PCR，都是间接的结果。要确定克隆的正确，一定要测序的啊。

你测个序，问题就迎刃而解了。到底是什么问题也就清楚了。追问

我前些天去遇到一样的问题，酶切鉴定正确，但测序后什么也不是呢

追答

所以根本就没有酶切的必要。这说明你在克隆的时候PCR产物就出错了。克隆了无关序列。大小正好和你的目标序列差不多。再次PCR的时候又发生了非特异性扩增，所以产物的大小又发生了变化。

你的PCR引物肯定有大问题。

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