如题所述
PCR产物直接测序,引物端约有几十个碱基是测不出来的,如果你恰好关注这个位置,那么或者从另一端测通(你的产物不长),或者克隆测序
此外,很多时候由于PCR产物不专一,直接测序效果不好,而克隆测序没这个问题,测序效果好于PCR产物测序。不过,如果你使用普通taq酶,PCR过程中会引入错误,用产物直接测序会掩盖这些错误,但克隆测序时则会保留这些错误。
此外,很多时候由于PCR产物不专一,直接测序效果不好,而克隆测序没这个问题,测序效果好于PCR产物测序。不过,如果你使用普通taq酶,PCR过程中会引入错误,用产物直接测序会掩盖这些错误,但克隆测序时则会保留这些错误。
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第1个回答 2013-01-22
PCR直接测序会存在或多或少的套峰,所以通常都采用双向引物测序,通过碱基互补原则来弥补单向没测出来的地方。克隆后测序就非常准确了,而且有时候PCR跑出来有杂带的话就必须克隆后再拿去测序了。我也涉入分子不久,希望回答能帮到你。
第2个回答 2013-01-24
模板会影响测序