His-tag是专门设计用于重组蛋白质的纯化,与其他标签相比有很多明显优势,是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。Tag虽然简单,但是做过的人都知道,融合蛋白的纯化并非简单。 1、纯化介质有10多种,应该如何选择?
2、洗脱的标签蛋白杂带较多是什么原因?如何优化?
3、甚至洗脱产物中没有目标蛋白原因为何?策略如何?
欢迎大家互相交流讨论啊!
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¸æ ç¾èç½ç纯å
His-Tagèåèç½æ¯ç®åæ常è§ç表达æ¹å¼ï¼èä¸å¾æçï¼å®çä¼ç¹æ¯è¡¨è¾¾æ¹ä¾¿èä¸åºæ¬ä¸å½±åèç½çæ´»æ§ï¼æ 论æ¯è¡¨è¾¾çèç½æ¯å¯æº¶æ§çæè å 涵ä½é½å¯ä»¥ç¨åºå®éå±ç¦»å亲åè²è°±å»ï¼IMACï¼çº¯åã
2ï¼1 IMAC(Immobilized Metal-ion affinity chromatography)æ¯Porath et al.1975å¹´ç¨åºå®IDAä½ä¸ºé åºçå¡«æè¯åè¿æ¸¡éå±éãéãé´æé离åï¼å¯ä»¥å¸é纯å表é¢å¸¦ç»æ°¨é ¸ãè²æ°¨é ¸æåè±æ°¨é ¸æ®åºçèç½ï¼1987å¹´Smith et al. åç°å¸¦æå 个ç»æ°¨é ¸æè²æ°¨é ¸å°è½åè¯åéå±ç¦»åçIDA-sephadex G-25ä½ç¨åæ´å¼ºï¼æ¤åå¨1986å¹´ä»åä»çåä½è ç¨Ni2+-IDA-sephadex G-25亲å纯åå¨æ°¨åºç«¯å¸¦ç»æ°¨é ¸åè²æ°¨é ¸çè°å²ç´ åãåå¹´1987å¹´Hochuli et al.åç°å¸¦æç¸è¿ç»æ°¨é ¸çå¤è½å¤è½åæ仪åNi2+-NTAå¡«æä½ç¨åæ´å¼ºäºæ®éçè½ï¼1988å¹´ä»ç¬¬ä¸æ¬¡ç¨è¿æ ·çæ¹æ³çº¯åäºå¸¦å 个ç»æ°¨é ¸æ ç¾çå¤è½ï¼æ 论æ¯å¨å¤©ç¶è¿æ¯åæ§æ¡ä»¶ä¸ä¸æ¬¡äº²å纯åé½å¾å°å¾å¥½ææï¼æ¤å表达带å 个ç»æ°¨é ¸æ ç¾çèç½é åIMACåå¾é常æ®éï¼ç¸å¯¹èè¨ï¼ä¸å¸¦æ ç¾çèç½çº¯åå°±é常å°é¾ï¼æ以表达带å 个ç»æ°¨é ¸æ ç¾çèç½é åIMAC纯ååææ常ç¨èä¸æææçç 究èç½å¤è½åæ仪ç»æååè½çæåæ段ã1986å¹´Porath et al.è¿åç°Fe3+-IDA-sephadex G-25å¯ä»¥ç¨äºç£·é ¸åèç½ç纯åï¼èååç°Ga3+-IDAä¹æåæ ·çææï¼è¿æ ·è¯åè¿ä¸¤ç§éå±ç¦»åçå¡«æå°±ææç¨äºç£·é ¸åå¤è½çå¯éå纯åï¼åæ¶IMACä¹å¯ä»¥ç¨äºçº¯ååç§åéå±ç¦»åç»åçå¤è½ï¼åºç¨é常广æ³ã
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