如题所述
探索真核表达系统的神秘世界,大俊深入解析第二弹——哺乳动物细胞的魔法舞台。这个精密的体系分为瞬时、稳定和诱导三大篇章,凭借其卓越的DNA转染稳定性和翻译后修饰等特性,成为了药物研发的理想之地。接下来,我们将一同揭开其六个关键环节的神秘面纱:
载体的秘密花园: 原核复制子、抗生素抗性基因,加上病毒或细胞源的启动子(如SV40和CMV),以及增强子和终止子等元件,如pcDNA3质粒载体,都是构建高效表达系统的基石。
载体的选择则如诗如画:非病毒载体如pcDNA3.1,凭借其CMV增强子启动子和多功能多克隆位点,与病毒载体(如逆转录病毒和慢病毒)形成鲜明对比。逆转录病毒虽高效,但潜在致癌风险不容忽视;慢病毒则以其严格的宿主范围,成为改造难转染细胞的得力助手。
细胞的魔法之旅: 哺乳动物细胞因其感染能力和广泛的宿主范围,如腺病毒的高滴度和AAV的广泛感染性,成为基因表达的黄金舞台。但它们的局限在于只感染增殖细胞,且随机整合可能带来风险。
为了提升表达效率,高效载体构建策略如基因扩增和调控元件调整应运而生。dhfr和GS系统助力基因的疯狂生长,而筛选标记的弱化则巧妙地平衡了表达和细胞生长的和谐。
细胞世界的欢迎仪式: 从HEK293(瞬时转染)到PER.C6(无血清生长),再到NS0/Sp2/0(抗体生产的摇篮)和CHO细胞(适应力与可定制性并存),每一种细胞都扮演着独特角色。
导入方法则如魔术师的变幻手法,病毒感染如病毒颗粒,非病毒感染如脂质体、显微注射,每一种都有其特定的时间、表达水平和适用范围。
最后,高通量筛选技术如FACS和ClonePix,是寻找黄金细胞克隆的精密罗盘,通过荧光活化细胞分选和荧光抗体筛选,筛选出高效表达的细胞群。
这一切,都源于对真核表达系统的深入理解与精心雕琢。每一项技术都像一枚魔法符咒,解锁着生命科学的无限可能。参考文献中,众多科研巨匠的智慧结晶等待着你的探索。
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