真核表达系统（第二弹）——哺乳动物细胞表达系统

探索真核表达系统的神秘世界，大俊深入解析第二弹——哺乳动物细胞的魔法舞台。这个精密的体系分为瞬时、稳定和诱导三大篇章，凭借其卓越的DNA转染稳定性和翻译后修饰等特性，成为了药物研发的理想之地。接下来，我们将一同揭开其六个关键环节的神秘面纱：

载体的秘密花园: 原核复制子、抗生素抗性基因，加上病毒或细胞源的启动子（如SV40和CMV），以及增强子和终止子等元件，如pcDNA3质粒载体，都是构建高效表达系统的基石。

载体的选择则如诗如画：非病毒载体如pcDNA3.1，凭借其CMV增强子启动子和多功能多克隆位点，与病毒载体（如逆转录病毒和慢病毒）形成鲜明对比。逆转录病毒虽高效，但潜在致癌风险不容忽视；慢病毒则以其严格的宿主范围，成为改造难转染细胞的得力助手。

细胞的魔法之旅: 哺乳动物细胞因其感染能力和广泛的宿主范围，如腺病毒的高滴度和AAV的广泛感染性，成为基因表达的黄金舞台。但它们的局限在于只感染增殖细胞，且随机整合可能带来风险。

为了提升表达效率，高效载体构建策略如基因扩增和调控元件调整应运而生。dhfr和GS系统助力基因的疯狂生长，而筛选标记的弱化则巧妙地平衡了表达和细胞生长的和谐。

细胞世界的欢迎仪式: 从HEK293（瞬时转染）到PER.C6（无血清生长），再到NS0/Sp2/0（抗体生产的摇篮）和CHO细胞（适应力与可定制性并存），每一种细胞都扮演着独特角色。

导入方法则如魔术师的变幻手法，病毒感染如病毒颗粒，非病毒感染如脂质体、显微注射，每一种都有其特定的时间、表达水平和适用范围。

最后，高通量筛选技术如FACS和ClonePix，是寻找黄金细胞克隆的精密罗盘，通过荧光活化细胞分选和荧光抗体筛选，筛选出高效表达的细胞群。

这一切，都源于对真核表达系统的深入理解与精心雕琢。每一项技术都像一枚魔法符咒，解锁着生命科学的无限可能。参考文献中，众多科研巨匠的智慧结晶等待着你的探索。