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做原核表达的目的
原核表达
产物的鉴定方法
答:
2.PCR扩增片段3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接,通过蓝白斑筛选,提质粒并酶切鉴定;将正确连接的克隆载体重组质粒酶切,回收
目的
片段4.目的片段与
表达
载体连接5.转化到DH5a等克隆菌株,通过抗生素筛选,鉴定表达重组质粒。6.测序检测7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株8.表达 ...
原核表达
没有
目的
条带!!!
答:
IPTG的浓度高了吧,形成包涵体了 降低IPTG浓度和诱导温度,掌握好诱导时间试试
真
原核
基因
表达的
区别
答:
当一个有缺陷时另一个可以补充;2、
原核
生物染色体不与组蛋白结合,省去的解聚的步骤;3、原核生物的转录与翻译都在同一区间,而真核是分开的;4、真核生物基因内有内含子,mRNA会有一个自我剪接的修饰过程,原核生物则不会;5、真核生物蛋白质的翻译后修饰比
原核的
更复杂 ...
原核表达
产物纯化后有一条非
目的
蛋白条带,怎么办
答:
如果有抗体,做个western blot判断下,是杂带还是降解片段;如果是杂带,优先考虑优化你使用的纯化方案,如Ni柱,考虑延长washing buffer的时间和提高咪唑浓度,使用分辨率更好的填料;还去不掉,考虑用2步或3步纯化,比如用离子交换、凝胶过滤。个人见解,仅供参考,祝一切愉快!
根据真核基因在
原核
细胞中
表达的
特点,表达载体必须具备那些条件?_百度...
答:
【答案】:(1)能够独立的复制;(2)具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记,以利于外源基因的克隆、鉴定和 筛选;(3)应具有很强的启动子,能为大肠杆菌的RAN聚合酶所识别;(4)应具有阻遏子 (5)应具有很强的终止子 (6)所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号。
请论述酶蛋白基因克隆,
表达
,蛋白纯化时须考虑的因素(救救孩子吧)_百度...
答:
最简单还是
原核表达
,直接用cDNA就好了。如果是原核表达,需要考虑是表达可溶蛋白还是包涵体,这与表达量,温度,克隆时加不加tag都有关系。纯化主要就是保证酶活,尽量方便,快速,经济。这与
目的
有关,生产还是科研,纯度要求如何,相差很大。直接用发酵液的也有,简单沉淀的也有,多次电泳层析的也有。
真核基因在
原核
系统
表达的
主要步骤
答:
理论上不同来源的基因在不同受体中
表达的
机理都是基本相同的,所部同的是合成的蛋白质在修饰和折叠上有所不同,因此表达效果也不尽相同。从技术上常用的流程大概就是:①
目的
基因连接上载体,②将载体(通常为质粒)转染细菌,③培养并富集目的细胞,④检验表达效率。(各个流程几乎都有很良好的试剂盒...
原核
系统中影响外源基因
表达
效率的主要因素?
答:
将特定的外源基因构建在植物
表达
载体中并转入受体植物,并不是植物遗传转化的最终
目的
。理想的转基因植物往往需要外源基因在特定部位和特定时间内高水平表达,产生人们期望的表型性状。然而,近二十年的发展历史却表明,外源基因在受体植物内往往会出现表达效率低、表达产物不稳定甚至基因失活或沉默等不良现象,导致转基因植物...
急用!一论述题:如何克隆一个功能性基因,如何在
原核
系统中高效
表达
?
答:
2、
原核
生物的表达是以操纵子为单位的。操纵子是数个相关的结构基因及其调控区的结合,是一个基因
表达的
协同单位。调控区主要分为三个部分:操纵基因、启动子及其他有调控功能的部位。3、功能性基因一般是真核生物所具有的基因,而真核生物基因基本具有外显子和内含子等结构。
原核
基因一般不含有内含子...
原核
生物中
表达
真核蛋白应该注意什么问题
答:
因为
原核
生物缺乏翻译后的修饰,所以
表达的
真核蛋白和真核中表达有所差异,可能没有生物学活性等,但是要是做免疫原应该没问题;基因需为cDNA,不能含有内含子,原核细胞不能对mRNA进行剪切;要分析DNA序列信息,分析其密码子,由于
原核
与真核生物的密码子偏好性不同,所以有时可能会出现稀有密码子而...
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