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原核表达扩大体系后没有表达出蛋白
原核表达
目的
蛋白不表达
怎么办
答:
不过你的蛋白不表达,
很可能是形成了包涵体
,这个是一个非常大的问题,更换可溶性表达标签是一个方法 建议你去查一查文献
构建的
原核表达
载体,测序也正确,为什么有的就
不表达
目的
蛋白
?
答:
先测序看看序列是不是三的倍数,保证是连接到载体上,并且载体也是转入表达菌的,不行的话,通常做法是调节诱导剂浓度,诱导时间,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个
蛋白
始终
没有表达
,没办法放弃了。
我做
了表达
实验,但却
没有
目标
蛋白
的表达,为什么
答:
用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化的
蛋白
性质稳定,经原核系统
表达之后
仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。有的时候在不同的
表达体系
里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候,一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列...
原核表达
菌之前可以表达蛋白,为什么放一段时间
不表达蛋白
了
答:
原核表达
宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成
蛋白表达
变少或者
不表达
。
原核表达
,为什么空载表达的很好,目的
蛋白没有表达
,可能的原因有...
答:
目的
蛋白
的表达跟基因本身关系密切,载体,表达条件关系也很大。空载体能
表达不
代表你的蛋白能在该条件下表达。
利用
原核表达
的
蛋白表达
量怎么越来越低
了
?
答:
如果楼主你的实验设计没任何问题,并且你的实验步骤也很严谨的,但是你就是找
不
出原因来的哈耶正常哈!生物实验有时很诡异的!~楼主你也不要着急哈,你换个人或者换个环境再做做看看,所不定就行了!~~~楼主好运!!!~~~
做
蛋白
的
原核表达
时为什么总是不稳定,明明上次已经
有表达
了,现在又老做...
答:
这个很正常,我也碰到过,有时候是找不出原因的,只能再转化,设置重新开始,筛选稳定的了。
相比真核表达系统,
原核表达
系统的劣势体现在
答:
1、E.coli是当前采用最多的
原核表达体系
,其优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模生产工艺,其缺点为:由于缺乏转录后加工机制只能表达克隆cDNA,
不
宜表达真核基因组的DNA;由于缺乏适当的翻译后加工机制,表达产物无修饰过程,分子构型可发生改变。2、表达的
蛋白质
常常形成不溶性的包涵体;很难...
原核表达
常见问题(三)
蛋白
纯化后续的问题分析
答:
3. 标签
没有表达出来
:1. 可能是因为折叠构象不正确导致标签在重折叠时没有位于
蛋白质
分子的表面上无法与离子柱结合。2. 标签在折叠时没有位于蛋白质分子的表面上。4. 填料有问题,换填料。5. PH、离子强度是否合适,平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。1. 蛋白质的折叠形态发生了改变...
真核生物
蛋白
如何在
原核
生物中
表达
答:
首先,
蛋白
是无法表达的,LZ想说的应该是能
表达出
这种蛋白的基因 那先要获取表达出此蛋白的基因(目的基因)然后将此基因整合进
原核
生物的DNA中 若要检测目的基因是否表达,可以将一段可以表达出抗药性的基因与目的基因一同转入,
之后
可将抗生素加入被植入目的基因的原核生物培养基中,则存活下来的个体就能将...
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