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蛋白原核表达不出来
原核表达
目的
蛋白不
表达怎么办
答:
不过你的蛋白不表达,
很可能是形成了包涵体
,这个是一个非常大的问题,更换可溶性表达标签是一个方法 建议你去查一查文献
构建的
原核表达
载体,测序也正确,为什么有的就不表达目的
蛋白
?
答:
先测序看看序列是不是三的倍数,保证是连接到载体上,并且载体也是转入
表达
菌的,不行的话,通常做法是调节诱导剂浓度,诱导时间,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个
蛋白
始终没有表达,没办法放弃了。
...转至BL21
原核表达蛋白
,,怎么也诱导
不出来
?同批次的BL21别人能诱导...
答:
1
可能是太弱你看不出来,建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出
。2 是不是融解性太差,建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体
原核蛋白表达
,总是在沉淀中,怎么解决
答:
应该是原核表达宿主菌比较准确
原核表达宿主菌之前可以表达蛋白,放一段时间不表达蛋白原因很多 首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等 原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。
做
蛋白
的
原核表达
时为什么总是不稳定,明明上次已经有表达了,现在又老做...
答:
这个很正常
,我也碰到过,有时候是找不出原因的,只能再转化,设置重新开始,筛选稳定的了。
蛋白表达不出来
怎么办
答:
是
原核表达
还是真核表达?换载体,换细胞/细菌,换诱导条件等等 也有可能检测方法不对,或者抗体失效等等
真核生物
蛋白
如何在
原核
生物中
表达
答:
首先,
蛋白
是无法表达的,LZ想说的应该是能
表达出
这种蛋白的基因 那先要获取表达出此蛋白的基因(目的基因)然后将此基因整合进
原核
生物的DNA中 若要检测目的基因是否表达,可以将一段可以表达出抗药性的基因与目的基因一同转入,之后可将抗生素加入被植入目的基因的原核生物培养基中,则存活下来的个体就能将...
原核表达
,得不到目的条带怎么办?
答:
转化完成,诱导
表达
之后先做DNA水平的检测,再做
蛋白
水平的检测 如果DNA水平的检测没有检测到目的基因,那就是转化不成功。如果DNA检测到了,说明你的启动子有问题,或者启动子后面有碱基突变导致移码,这样就需要检查转化之前你的质粒测序图谱了,也许有突变或者碱基缺失你没有注意到 ...
原核表达发现在37℃诱导
不出来原核表达
测序回来如何判断
蛋白
译码
答:
在
原核蛋白表达
体系中,如E.coli(大肠杆菌表达系统),外源基因通常需要诱导剂的诱导才能进行表达,本文详细讲述了常用诱导剂IPTG 诱导原理,对外源蛋白诱导表达原理以及实验步骤。
原核
生物绝大多数的基因按功能相关性成簇地排列,且密集于染色体上,共同形成一个转录单位——操纵子,也称基因表达的协同单位。
为什么
原核
生物不能完整的
表达
真核生物的
答:
真核生物的细胞核基因转录成mRNA后要进行加工,将内含子转录的部分剪切掉,只剩下外显子转录的部分。而
原核
生物的基因中没有内含子和外显子之分,基因转录后也不进行上面所说的那些加工过程。所以基因工程中如果将真核生物的基因转入原核生物的细胞中是不能
表达出
原来的
蛋白质
的。
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