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蛋白原核表达摇菌
原核表达
大摇
摇菌
时间
答:
12到16小时。
原核表达大摇摇菌
的时间要求一般不是很严格,通常12-16小时,摇菌还分为大摇和小摇,大摇时间为16个小时,小摇时间为12个小时。
原核表达蛋白
1l
菌
液加多少lysis buffer
答:
BL21是比较基础的宿主,转化后
摇菌
到对数,加20%的甘油,放在-20度可以保存半年,-80度可以多保存几个月。放时间长了都不太好,建议三五个月复苏一次。
蛋白
是包涵体形式,主要还是和蛋白的性质有关,虽然还有几种在BL21基础上改造的宿主,但是效果还要因你蛋白的性质而异。建议换换其他
表达
载体,优化...
求求。。。进行
蛋白质
分离纯化前,小试管预实验法具体步骤???望高手指点...
答:
既然是小“试管”,应该是
原核表达
吧,一般多用lacZ启动子来诱导表达,你没多说,我就按这个步骤来说:1,检测
表达蛋白
的可溶性:用新鲜菌种接种5ml或10ml
摇菌
,先37℃摇,3小时后诱导3h(这个温度和时间有文献参考是最好的),收菌体,用pbs洗2遍,再1mlPBS悬浮,破菌(超声,或加溶菌酶,或试剂...
这是一道考研题:现需要得到某个基因的
蛋白表达
产物,用来制备该基因的多...
答:
2.得到目的蛋白:将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中,将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中,
摇菌
过夜→提取质粒,进行PCR鉴定与酶切鉴定确定转入的不是空质粒→送测→将的到地带有目的蛋白基因的质粒转入到BL21(DE3)菌系中→诱导
表达蛋白
→进行SDS-PAGE检测...
关于
原核表达
小量检测的问题
答:
可以试着培养久一点,2h死的可能是没有抗性能力的那部分细菌,有抗性的克隆因为量太少而显得
菌
液很清澈,摇床摇时间久一点(大肠杆菌是14min一代,从几个到几百万个,需要时间的),过夜,试试。我以前也遇到这种问题
超声法破碎细胞提
蛋白质
的具体步骤
答:
开80hz的频率进行破碎细菌,待到细菌全部破碎,溶液变清亮为止,然后你可以洗涤沉淀,进行包涵体蛋白的收集,后面你可以做一个SDS-PAGE
蛋白质
电泳和Western-blot,这样就可以确定你的要蛋白是不是你的蛋白。最后,你可以大量的
摇菌
提取蛋白质了,祝你好运,我也是做这方面的研究,已经做到蛋白质电泳这一步...
请设计试验,利用基因工程手段
表达
并分离小鼠免疫球
蛋白
。
答:
1、提小鼠基因组DNA,设计引物进行PCR。将产物连接到载体上,转化涂平板挑单菌落后
摇菌
,进行菌液PCR,测序证实为目标序列后进行后续实验。2、从菌液中提取质粒,经双酶切回收目的片段,与经同样酶切的
原核表达
载体连接,再经酶切鉴定及序列分析证实已成功构建融合表达载体。3、将重组原核表达载体转化入...
下面是通过
原核表达
系统得到基因表达的产物以及制备多克隆抗体的...
答:
1.得到目的基因:设计引物(引物上带有酶切位点)→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上 2.得到目的
蛋白
:将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系中,将菌涂布与相应的抗性LB培养过夜→挑菌→接到相应抗性的液态LB中,
摇菌
...
请问IPTG能否在4℃诱导融合
蛋白表达
???
答:
条带亮不亮应该是根据你诱导的
蛋白
好不好
表达
而定的。你放冰箱后,IPTG在
摇菌
的时候就诱导表达。
...个基因的序列及其所属物种,如何通过试验方法获得该基因的
表达
...
答:
第二步 将编码序列克隆到表达载体上:
原核表达
载体 或真核表达载体 最好带标签的(例如his6,gst 目的为了检测和纯化)第三步 载体转化宿主,进行目的基因的表达。通过标签进行纯化 === 以上是通过基因工程技术外源表达的方法 如果想获得内源
蛋白
如下 获得该蛋白的抗体(通过基因工程产物...
1
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