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原核表达每次重转吗
做蛋白的
原核表达
时为什么总是不稳定,明明上次已经有表达了,现在又老做...
答:
这个很正常,我也碰到过,有时候是找不出原因的,只能再转化
,设置重新开始,筛选稳定的了。
原核表达
阳性菌种解冻后必须重新划线挑单克隆菌落吗
答:
理论上挑单克隆会好点,因为质粒一般都有抗性筛选的,安全第一嘛,所以需要再挑单克隆菌落
原核表达
载体原核表达载体构建
答:
构建
原核表达
载体是实现基因功能研究和生物制品生产的关键步骤,尤其在细菌中表达目的蛋白。这一过程主要包括获得目的基因、构建重组表达载体及获得含重组表达质粒的表达菌种。首先,通过PCR或RT-PCR方法获取目的基因。PCR利用特定引物扩增基因片段,而RT-PCR则通过逆转录RNA形成cDNA,再进行PCR扩增,尤其适合从m...
在
原核表达
蛋白时,由于用的是原核表达载体PET28a,属于卡那抗性,但忘...
答:
理论上影响是比较大的,
原核
LB培养不加抗生素的话,很容易出现丢失了带有外源基因质粒的生长速度比目的菌的生长速度快得多的情况。最后的结果就是影响目的蛋白的
表达
量。所以如果这个蛋白表达培养的实验是第一次做的话,建议重做一遍以保证数据的准确。如果不是第一次做的话,可以对比下之前的表达数据验证...
在做
原核表达
的时候带信号肽表达时没有表达,去掉信号肽后就表达了,这...
答:
原核表达
是边转录边表达的,没有区域间隔。信号肽大多是疏水性的,溶解性较差,所以在原核中的表达会有些困难。另外原核生物本身的基因中是不存在什么信号肽片段的,信号肽序列中的密码子对原核生物来说可能是稀有密码子。
真核表达系统与
原核表达
系统的异同?
答:
1、真核基因与
原核
基因的调控一样,都是以转录水平调控为最重要;2、结构基因均有调控序列,并依靠特异蛋白因子与这些调控序列的结合与否调控基因的表达;3、都要经历转录、翻译过程;4、表达过程都有复杂性、多环节。真
核表达
系统和原核基因表达调控的不同点:1、真核基因表达调控过程更复杂;2、在...
原核表达
常见问题(三)蛋白纯化后续的问题分析
答:
3. 标签没有
表达
出来:1. 可能是因为折叠构象不正确导致标签在重折叠时没有位于蛋白质分子的表面上无法与离子柱结合。2. 标签在折叠时没有位于蛋白质分子的表面上。4. 填料有问题,换填料。5. PH、离子强度是否合适,平衡缓冲液是否应与样品缓冲液 pH、离子强度相同。1. 蛋白质的折叠形态发生了改变...
原核
与真核基因
表达
有哪些差异,为什么会有这些差异
答:
相同点:
原核
生物和真核生物的基因组成大体上都分为编码区和非编码区;不同点:原核生物的基因编码区是连续的,而真核生物的基因编码区是不连续的,分为内含子和外显子。
原核
与真核细胞的基因
表达
过程都需要经历转录,翻译几个过程.但真核生物的基因结构要复杂一些,在DNA的基因区段不仅有直接控制...
原核表达
蛋白1l菌液加多少lysis buffer
答:
BL21是比较基础的宿主,转化后摇菌到对数,加20%的甘油,放在-20度可以保存半年,-80度可以多保存几个月。放时间长了都不太好,建议三五个月复苏一次。蛋白是包涵体形式,主要还是和蛋白的性质有关,虽然还有几种在BL21基础上改造的宿主,但是效果还要因你蛋白的性质而异。建议换换其他
表达
载体,优化...
真核细胞
表达
和
原核
细胞表达有什么不同?他们表达产生的活性蛋白有什么不...
答:
首先得从细胞的结构说起:真核细胞具有各种胞内细胞器,而
原核
细胞却除核糖体之外不存在其他细胞器。这与基因的
表达
是密不可分的。真核细胞的基因是有外显子和内含子组成的,而原核细胞却无此之分。在细胞内DNA进行转录是都是从启动子开始,按照碱基互补配对原则依次进行。只是翻译产物会有所不同,...
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