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原核表达蛋白大小不对
原核表达蛋白大小
偏小
答:
表达出来的蛋白比实际大小要小,这是为什么?2019年9月25日 | By Annsci0
主要原因有如下几个方面 蛋白本身被降解了
,可以存在一些不利于该蛋白稳定的蛋白酶 翻译起始位点的问题:如果一个类似于核糖体结合位点(AAGGAGG)的序列加上适当的间隔序列出现在了ATG密码子上游,降解就会有可能出现。解决的方法...
原核
生物中
表达
真核
蛋白
应该注意什么问题
答:
基因需为cDNA,不能含有内含子,原核细胞不能对mRNA进行剪切;要分析DNA序列信息,分析其密码子,由于原核与真核生物的密码子偏好性不同,所以有时可能会出现稀有密码子而影响表达的情况;要注意你要
表达蛋白
的
大小
问题,一般情况下大于70KD的蛋白在原核菌种不容易表达或表大量低;
原核表达
出来的一般是包...
100KD
的蛋白质
在大肠杆菌中好
表达
吗
答:
蛋白大小和表达强弱没有密切的关系(当然过大的蛋白质 原核表达 困难)
,要看你的蛋白的来源(原核还是真核来源、是否经过修饰等).不好表达.表达出来活性也很可能没有.大肠杆菌表达系统缺乏 糖基化 .
原核表达
时跑完电泳,条带应该是多大,是和自己的目的基因
蛋白
的分子量一...
答:
原核表达
的
蛋白
是没有修饰作用的,一般而言电泳表观分子量应该与蛋白分子量+标签的
大小
一致。但有时候会有一定的迁移,比如用pet28a表达的蛋白进行电泳时表观分子量会比蛋白分子量+标签大5kD左右。不过通过对比未诱导的阴性对照能很清楚地看出来自己表达的蛋白。
以前养的菌
表达
的
蛋白不
一样了
答:
首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等
。原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。
如何确定一个
蛋白
选用真核表达还是
原核表达
、
答:
一般真核生物来源
的蛋白质
用真核表达,原核生物来源的用
原核表达
,因为真核生物和原核生物有密码子偏好,比如说同一个氨基酸可以由A和B两种密码子编码,真核生物偏好A,含有A的序列在真核中表达量较高,否则,含有B的序列表达量很低.
外膜
蛋白
和
原核表达
出来的蛋白是一样的吗
答:
外膜
蛋白
是膜外蛋白吗?还是膜蛋白的膜外部分。一般情况下涉及到膜蛋白,原核都很难表达出完全一致的,但是有些比较简单的蛋白,或者膜蛋白的胞外部分可以用
原核表达
,容易形成包涵体,要进行detergent的摸索才能提取出来。
原核表达
第一次大量表达了目的
蛋白
但第二次表达出的目的蛋白就很少了为...
答:
目的
蛋白
的表达跟基因本身关系密切,载体,表达条件关系也很大。空载体能
表达不
代表你的蛋白能在该条件下表达。
原核表达
目的条带的表达还要算上质粒上的
大小
吗
答:
质粒的
大小
是DNA,与
表达
后目的
蛋白
的大小无直接关系;在算目的蛋白的大小时,要考虑的是有无标签或报告基因,如His-Tag,GST-Tag,GFP等,尤其是GST好GFP,分子量不小,必须考虑.祝好!
关于
原核表达
问题
答:
OD600只能看出菌体浓度,一般超过1.0才够,我们的经验是500ml的菌液在锥形瓶里摇到发白,手掌放在瓶底下从上面看不清手指了,就OK了,但关键还是要看你的目的蛋白浓度,条带会变成很明显的一大团。诱导的起始浓度是要测定的,一般都是1.0,诱导时间是取样以后根据诱导
蛋白表达
情况测定的,没有统一...
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