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原核表达诱导时间过长会怎样
原核表达
在16度应
诱导
多长
时间
答:
低温
诱导
一般需要的
时间
都比较长,一般如果能够诱导出来的话大概是24小时。如果是PET系统的话,有些蛋白是16度诱导不出来的,你得自己重新摸一下诱导的温度。
原核表达诱导
超过1了
怎么
办
答:
减少诱导时间、降低诱导剂浓度。
1、减少诱导时间:原核表达诱导超过1
,可以减少诱导时间,以避免过表达的情况。2、降低诱导剂浓度:可以降低诱导剂的浓度,以避免过表达的情况。
原核表达
16度
诱导
多久合适
答:
12到48小时。
原核表达
系统是表达外源基因的一种方法,在16摄氏度下进行
诱导
的
时间
控制在12到48小时范围内,可以使得蛋白缓慢合成,有利于蛋白的正确折叠,从而形成可溶性蛋白。
诱导时间
越
长会
影响包涵体的形成吗
答:
水平
表达
时,由于大肠杆菌细胞质是一个偏还原性的环境,蛋白质容易形成错配的二硫键,这常常是包涵体形成的主要原因。膜蛋白具有暴露的疏水区,表达时易于聚集形成包涵体,也有可能由于降解或对细胞的毒性作用使得表达水平极低。蛋白质的糖基化可以影响到蛋白质的折叠行为和溶解性,当它们在
原核
系统进行表达...
原核表达
菌液的OD值过高再去
诱导
蛋白可以吗
答:
一般情况下 OD值在0.5~0.8都可以
诱导
,其实1也可以 但是超过1最好还是别诱导了。。。
我做
原核表达
,PET32a连入目的基因用的是BamHI和SalI两个位点,请问表达...
答:
这说明你的目的蛋白没有
表达
,因为PET32a空载表达的蛋白就有20KD左右,当然
诱导时间长
了表达量就会越大
关于
原核表达
问题
答:
OD600只能看出菌体浓度,一般超过1.0才够,我们的经验是500ml的菌液在锥形瓶里摇到发白,手掌放在瓶底下从上面看不清手指了,就OK了,但关键还是要看你的目的蛋白浓度,条带会变成很明显的一大团。诱导的起始浓度是要测定的,一般都是1.0,
诱导时间
是取样以后根据诱导蛋白
表达
情况测定的,没有统一...
原核表达
菌液的OD值过高再去
诱导
蛋白可以吗
答:
一般都是在对数生长期进行
诱导表达
。OD值过高,细菌可能已经老化,诱导也表达量较少甚至不表达
原核表达
未
诱导
与诱导差别不大什么原因
答:
蛋白直接没有
诱导
出来。导结果差别不大的话,是蛋白直接没有诱导出来,换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看。广义的
原核表达
,是指发生在原核生物内的基因表达。狭义的原核表达,常出现于生物工程中。是指通过基因克隆技术,将外源目的基因,通过构建表达载体并导入表达菌株的方法,使...
构建的
原核表达
载体,测序也正确,为什么有的就不表达目的蛋白?
答:
先测序看看序列是不是三的倍数,保证是连接到载体上,并且载体也是转入
表达
菌的,不行的话,通常做法是调节诱导剂浓度,
诱导时间
,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个蛋白始终没有表达,没办法放弃了。
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