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原核表达诱导浓度
原核表达诱导
超过1了怎么办
答:
减少诱导时间、降低诱导剂
浓度
。1、减少诱导时间:
原核表达诱导
超过1,可以减少诱导时间,以避免过表达的情况。2、降低诱导剂浓度:可以降低诱导剂的浓度,以避免过表达的情况。
关于
原核表达
问题
答:
诱导的起始浓度是要测定的,
一般都是1.0
,诱导时间是取样以后根据诱导蛋白表达情况测定的,没有统一安排。一般还要做IPTG浓度梯度,温度梯度寻找最佳条件。
为什么在做
原核表达
SDS-PAGE时对照的还要做个加
诱导
剂的呢,那诱导剂...
答:
因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你的目的基因的特异
表达
。如果做目的基因不加
诱导
剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平。也可以看出诱导剂的作用。我们实验室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照。
原核表达16度诱导
多久合适
答:
12到48小时。原核表达系统是表达外源基因的一种方法,
在16摄氏度下进行诱导的时间控制在12到48小时范围内
,可以使得蛋白缓慢合成,有利于蛋白的正确折叠,从而形成可溶性蛋白。
原核表达
菌液的OD值过高再去
诱导
蛋白可以吗
答:
一般情况下 OD值在0.5~0.8都可以
诱导
,其实1也可以 但是超过1最好还是别诱导了。。。
...plysS蛋白
表达
的最佳温度,时间,IPTG的
浓度
,
诱导
时菌液的最佳浓度...
答:
一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终
浓度
1mM的IPTG(这个一般不变,
诱导
不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大小、性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻找合适诱导时间,如果不想这么麻烦,直接过夜诱导。诱...
原核表达
包涵体复性实例
答:
步骤如下:泳道1:
诱导
前状态泳道2:诱导后状态泳道3-14:逐步降低尿素
浓度
(8M-6M-4M-2M-1M-0.5M-0M)并进行洗杂,最后用咪唑buffer洗脱复性蛋白复性后,根据实验需要,通过进一步纯化步骤来优化样品。包涵体的处理需要针对具体情况进行调整,这既需要试验的耐心,也考验科研者的探索精神。
使用T7启动子,BL21(DE3)菌株,加入的IPTG的终
浓度
要到多大才能起到
诱导
的...
答:
最佳
浓度
是1mM,但是这样非常容易形成包涵体。如果包涵体可以用的话,比如做抗体,那么当然是蛋白越多越好,不过大多数时候我们需要蛋白的可溶性
表达
,所以这个浓度也需要摸索。如果你的蛋白必须是可溶性表达的话,那么建议你用较低浓度的IPTG,我用过最低浓度是0.1mM,效果不错,当然这也需要你延长
诱导
的...
原核表达
详细步骤
答:
提升效率与纯化的魔法棒:提高表达水平时,分阶段生长和表达,调整IPTG
浓度
和温度,是优化蛋白活性和溶解性的秘密武器。检测
诱导表达
时,酶溶法和超声破碎法是常见的工具,SDS-PAGE是解读结果的窗口。基因改造可解决溶解性问题,同时注意低温操作和蛋白保存条件。总的来说,
原核表达
的每一步都要求精细操作和...
基因
原核表达
的详细过程
答:
重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5kD的融合蛋白。【结论】 成功构建了人resistin基因
原核表达
载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打...
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