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原核表达IPTG浓度
原核表达iptg浓度
多少求答案
答:
原核表达的iptg浓度随菌种的改变而改变,
一般以1mM为经典浓度37摄氏度培养都有较高表达
,时间为6或8小时,
关于
原核表达
问题
答:
诱导的起始浓度是要测定的,
一般都是1.0
,诱导时间是取样以后根据诱导蛋白表达情况测定的,没有统一安排。一般还要做IPTG浓度梯度,温度梯度寻找最佳条件。
...plysS蛋白
表达
的最佳温度,时间,
IPTG的浓度
,诱导时菌液的最佳浓度...
答:
一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终
浓度
1mM的
IPTG
(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导蛋白大小、性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻找合适诱导时间,如果不想这么麻烦,直接过夜诱导。诱...
IPTG
诱导蛋白
表达
的原理及方法步骤
答:
(4) 如果
表达
载体的
原核
启动子为PL启动子,则在30-32℃培养数小时,使培养液的OD600达0.4-0.6,迅速使温度升至42℃继续培养3-5h;如果表达载体的原核启动子为tac等,则37℃培养细菌数小时达到对数生长期后加
IPTG
至终
浓度
为1 mmol/L,继续培养3-5h。(5) 取上述培养液1 mL,1000g离心,1 m...
使用T7启动子,BL21(DE3)菌株,加入的
IPTG的
终
浓度
要到多大才能起到诱导的...
答:
最佳浓度是1mM
,但是这样非常容易形成包涵体。如果包涵体可以用的话,比如做抗体,那么当然是蛋白越多越好,不过大多数时候我们需要蛋白的可溶性表达,所以这个浓度也需要摸索。如果你的蛋白必须是可溶性表达的话,那么建议你用较低浓度的IPTG,我用过最低浓度是0.1mM,效果不错,当然这也需要你延长诱导的...
原核表达
详细步骤
答:
提升效率与纯化的魔法棒:提高表达水平时,分阶段生长和表达,调整
IPTG浓度
和温度,是优化蛋白活性和溶解性的秘密武器。检测诱导表达时,酶溶法和超声破碎法是常见的工具,SDS-PAGE是解读结果的窗口。基因改造可解决溶解性问题,同时注意低温操作和蛋白保存条件。总的来说,
原核表达
的每一步都要求精细操作和...
为什么在做
原核表达
SDS-PAGE时对照的还要做个加诱导剂的呢,那诱导剂...
答:
因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你的目的基因的特异
表达
。如果做目的基因不加诱导剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平。也可以看出诱导剂的作用。我们实验室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照。
【菌周刊】简析大肠杆菌BL21及其衍生菌株
答:
对于星耀小TIP的注意事项,包括了确保感受态细胞在冰中缓慢融化,加入目的DNA应在融化后的短时间内进行,避免过长的冰中存放时间以防止转化效率降低;操作过程中应轻柔,避免使用强力吸打;对于高浓度的质粒,可相应减少最终用于涂板的菌量;诱导时可选择
IPTG浓度
,但最佳诱导条件(时间、温度、IPTG浓度)...
基因
原核表达
的详细过程
答:
重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5kD的融合蛋白。【结论】 成功构建了人resistin基因
原核表达
载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打...
如何提高外源基因片段在
原核
细胞中
表达
量
答:
. 转化涂板之后得到很多colony, 一定要试多个不同的克隆(colony), 因为天知道有的克隆就是
表达
得比另一个好. 另外还有这些变量要去优化: 诱导的时间 (细胞密度, 测OD600, 一般在0.6左右为佳), 诱导剂 (例如
IPTG
)的
浓度
, 蛋白表达的温度和时间 (经验证明,温度真是很重要!) .希望对你有帮助~
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