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大肠杆菌表达蛋白 不表达
如何检测
蛋白
在
大肠杆菌
中的
不表达
是因为mRNA的不稳定?
答:
不表达的因素多了:细胞毒性,N端信号肽,稀有密码子
,等等。你换GST或者Trx融合试过了么?hongkaichen(站内联系TA)这是老师的一个作业,思考题,跟实验无关,因为mRNA不稳定也可能造成蛋白不表达,所以如果是这种原因,就是让我们用什么方法验证是不是这种原因。开始我觉得可以用观察多聚核糖体现象来...
蛋白表达
不出来是怎么回事?
答:
第一步:确定载体序列是否正确,启示子、终止子、读码框等;第二步:确定操作步骤是否正确,如载体是否被污染,是否成功转化入rossetta,抗生素是否正确等;第三步:核对目的基因序列,与
大肠杆菌
常用密码子作对比,优化密码子;第四步:以上三步没有问题时,若还
不表达
,更换载体;第四步:更换载体还不...
蛋白表达
不出来是怎么回事?
答:
第三步:核对目的基因序列,与
大肠杆菌
常用密码子作对比,优化密码子;第四步:以上三步没有问题时,若还
不表达
,更换载体;第四步:更换载体还不表达,选择GST、MBP、SUMO、GB1等助溶标签融合表达。另外,当目的
蛋白
太小或太大时可能都不易表达:小肽易被降解;太长例如大的膜蛋白等表达量往往也很...
大肠杆菌
bl21为什么可以用来
表达蛋白
?
答:
不行的,一般克隆用菌如DH5α,质粒高拷贝,但诱导
表达
就不行。BL21等典型表达菌株,用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区,该区整合于BL21的染色体上。人体内
蛋白质
的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸(Amino a...
大肠杆菌
有
表达
分泌型
蛋白
的载体吗
答:
对于
表达
不同的
蛋白
,需要采用不同的载体。目前已知的
大肠杆菌
的表达载体可分为非融合型表达载体和融合型表达载体两种。非融合表达是将外源基因插到表达载体强启动子和有效核糖体结合位点序列下游,以外源基因mRNA的AUG为起始翻译,表达产物在序列上与天然的目的蛋白一致。融合表达是将目的蛋白或多肽与另一个...
100KD
的蛋白质
在
大肠杆菌
中好
表达
吗
答:
蛋白大小和表达强弱没有密切的关系(当然过大
的蛋白质
原核表达 困难),要看你的蛋白的来源(原核还是真核来源、是否经过修饰等).不好表达.表达出来活性也很可能没有.
大肠杆菌表达
系统缺乏 糖基化 .
用
大肠杆菌表达
动物基因一般会遇到什么问题?
答:
工程
菌表达
目的基因一般会出现基因排斥现象。如果目的基因忽然受体没有排斥现象的话,在目的基因标过程中可能会出现:
蛋白质
合成受阻或者氨基酸原料不足现象,动物基因的的表达直至蛋白质的合成需要经过内质网和高尔基体的加工,而且合成蛋白所需要的氨基酸在
大肠杆菌
中未存在,会出现基因表达不完全甚至无法进行...
大肠杆菌
在
表达
糖
蛋白
时无法糖基
答:
而在
大肠杆菌表达
的非糖基化
蛋白
常常会聚集成不溶性的包涵体。一方面,包涵体中的蛋白是没有生物活性的,需要通过后续的溶解、纯化、复性等使其变成有生物活性的蛋白;另一方面,一些糖蛋白在去除糖链后尽管仍具有一定的生物活性,但是易被蛋白酶降解。因此,真核细胞表达的干扰素需要糖链来稳定结构、帮助溶解, ...
为什么测序正确,在
大肠杆菌
中诱导却
不表达
?谢谢
答:
可能是包涵体形成了,不是
不表达
,而是
蛋白
不溶解!
大肠杆菌不
能生产糖
蛋白
,那为什么能生产胰岛素?
答:
大肠杆菌
是原核生物没有内质网,不能对
蛋白质
进行修饰变成糖蛋白。大肠杆菌可以作为受体细胞,是因为它拥有游离于拟核之外的可
表达
环状DNA——质粒.所以引入DNA片段要相对容易一些.而且大肠杆菌繁殖快,易培养,比较适宜工业生产。大肠杆菌有核糖体,就足以表达它的DNA了。蛋白质的合成,不是必须经过内质网和...
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