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载体构建不出来
构建
启动子
载体
遇到了困难,总出现假阳性的克隆,菌液PCR检测不到目的片 ...
答:
我想这是因为你的启动子检测载体设计的不合理造成的
,你可以在启动子前而加一个转录终止子,以阻止这种假阳性信号。还有一个原因是:如果是原核生物,启动子本来就只有几十甚至十几个bp,PCR检测不到很正常。
请教
载体构建
的问题!
答:
3.SmaI酶切体系是否正确?通常酶量不能超过体系1/10,否则甘油会妨碍酶切的进行。4.通常我做双酶切后会进行乙醇沉淀,去除内切酶,否则会对之后的连接反应造成影响。5.连接体系是否正确。这步是最关键,也是最容易出错的一步。
载体
和目的片段的摩尔数比应为3:1到10:1之间。可以先通过跑胶确定两者...
您好,我看您在表达
载体
这一块懂的比较多,我想请教您我
构建
PET32a表达载...
答:
首先分析测序结果是否正确,融合表达有没有同框,其次分析是没有表达还是表达较弱
,可以采用Western检测目标蛋白或者检测标签,如果是弱表达的话就需要优化表达条件。还有就是你构建的载体有没有转化进入表达宿主细胞,同时也要考虑密码子偏好性的问题。
构
载体
总是少一段怎么回事
答:
1、构建过程中出现了失误:在构建构载体的过程中
,出现了操作失误,导致某一段序列没有被正确地插入到构载体中。2、
测序误差
:构建好的构载体需要进行测序,有时会出现测序误差,导致测序结果不完整,缺失了某一段序列。3、
数据处理问题
:在数据分析和处理过程中,会出现某些数据被误判或者漏掉的情况,导...
如何
构建载体
答:
这主要是由于外源基因在受体植物的基因组内插入位点不同造成的
。这就是所谓的 " 位置效应 " 。为了消除位置效应,使外源基因都能够整合在植物基因组的转录活跃区,在目前的表达载体构建策略中通常会考虑到核基质结合区以及定点整合技术的应用。核基质结合区( m a t r i x a s s o c i a t i o n r e...
载体构建
的原理及方法
答:
原理步骤如下:1、
载体构建
的原理:载体构建是指将外源DNA片段导入到特定的载体中,以便将其传递到目标细胞中。常用的载体是质粒,其具有自主复制和传递的能力。质粒由多个功能区域组成,包括起始子、选择性标记基因、多克隆位点等,区域可以用于插入和操作外源DNA。2、载体构建的方法:将外源DNA片段与线性...
构建载体
出现原载体的原因
答:
1、构建基因表达载体的原因是因为如果没有表达载体,基因是无法进入目的细胞的,只需要记住在植入基因时
构建载体
即可。2、表达载体是必须构造的,一般为质粒(小型环状DNA)。3、如果没有表达载体你想要植入基因是不能实现的,先用限制性内切酶切开质粒,然后将基因插入,在用DNA连接酶连接上,记住连接酶和...
求助关于GUS验证
载体构建
的一些问题
答:
一般来说融合蛋白不影响gus的检测,不过影响不影响目的蛋白功能就不一定了。我个人倒是觉得,如果不做定位的的话,gus检测不是那么重要。可以把gus切下去(选用sacI位点)。pcr在基因组合转录组里面都能检测
出来
就认为目的基因正确表达了。要注意的是如果不融合的话别忘了CDS是要带终止密码子的。如果融合...
构建
的
载体
都测通吗
答:
不都测通。
载体构建
的成功与否取决于多种因素,如酶切位点选择、连接反应条件和宿主细胞类型。挑战包括不适合的酶切位点、连接条件不理想和宿主细胞状态。并非所有构建的载体都能成功实现预期功能,需要实验优化和技术经验的支持。
目的基因不能表达的原因有哪些?比如,
载体
没有进入,还有什么?
答:
总的来说有两方面的原因,一个是表达
载体
的问题,另一个是表达受体的问题。载体可能出现的问题是发生突变或者被修饰导致启动子缺失或者位置发生改变。受体方面,受体的突变也可能导致无法表达。有些时候即使两个都正确也有可能不表达,需要多筛选来看看。还有某些情况下,某些基因可能不适合在某些受体中表达...
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