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镍柱纯化蛋白说明书
Ni-NTA
镍柱纯化
操作
说明
(中文)
答:
兼容 ÄKTA 等高端设备,压力耐受0.3 MPaC600793: 5 mL (1-10柱子) - 重力预装,适合需要更多树脂的实验C600332: 1套包,包括10个柱子和缓冲液,一揽子解决
纯化
需求Ni-NTA树脂,专为携带组氨酸标签的
蛋白
打造,
镍柱纯化
详细步骤
答:
镍柱纯化
的基本步骤包括样品准备、柱层析、洗脱、再生等环节。下面将详细介绍镍柱纯化的具体步骤:样品准备 样品制备是成功进行镍柱纯化的关键之一。首先,需要准确测量目标
蛋白质
的含量,确定合适的溶液浓度。然后选择适当的缓冲液(如TBS、PBS等)保证蛋白质的稳定性。此外,将样品过筛或使用超声波破碎器打破...
蛋白
过
镍柱纯化
的原理和步骤是什么
答:
步骤是:过柱子前可以选择Ni柱重生,也就是往柱子里倒氯化镍,一个柱长体积就行了,然后平衡柱子,拿你自己的buffer,给
蛋白
提供最适的环境,我一般平衡4个柱长,然后蛋白上样,你可以让他自己挂,这样挂柱子的效果好一些,如果流速太慢,可以加个恒流泵,但是一定不能太快,太快挂柱效果差,当然你也可以选择循环挂柱,就...
蛋白
过
镍柱纯化
的过程 我是初学者,所以麻烦大家给的详细一点 谢谢啦...
答:
尿素溶解的可以进行SDS-PAGE
蛋白
电泳,盐酸呱溶解的不可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳,必须换缓冲液。洗脱液浓度太稀,可以加大咪唑浓度或者降低PH 来决定最佳洗脱条件如果在平衡前的洗柱发现了目的蛋白,证明起始缓冲液中的咪唑浓度太高,可适当降低。4 考马氏亮蓝或者银染发现多条带答:加入蛋白激酶抑制剂。可能是蛋白降解。
纯化蛋白
得
镍柱
使用后怎么处理
答:
如果不得不保存,要分装,留下马上就用的放在4℃,其他放低温,每次取1只;如果有冻干机,冻成干粉再放到-70比液态低温更好,再溶解也会好很多(但很多
蛋白
还是会有失活问题);关于保护剂,如果蛋白稳定性不强,一般会加甘油(5%-50%浓度)和叠氮钠(抑菌),这样一来,取出时,不得不做透析或...
镍柱纯化
总有一条杂
蛋白
怎么办?
答:
可以使用咪唑梯度洗脱,不知道你用的是什么仪器,有杂
蛋白说明
咪唑浓度还是太高啊 你的纯化方法有点问题。Ni
柱纯化蛋白
一般都要用梯度洗脱。一般用20mM、50mM、100mM、250mM,差不多用250mM洗下来的才是你的蛋白,40mM肯定有一些杂蛋白的啊,建议40mM洗完了,继续用250mM洗脱。我感觉可以从如下的方面...
镍柱
干了会怎么样
答:
蛋白变性。需要考虑你纯化好的蛋白是否满足你的使用,柱子干后会引起蛋白变性。蛋白过
镍柱纯化
的原理:ni柱中的氯化镍或者硫酸镍可以与有his(组蛋白)标签的碱性
蛋白蛋白
结合,组蛋白标签一般是6个组氨酸(碱性氨基酸)。
镍柱
每次
纯化
后都要再生吗
答:
不是。
镍柱
每次
纯化
后不是都需要再生。镍柱的亲和力和选择性较高,可以在纯化同一种
蛋白
时重复使用3到5次,而在使用3到5次后,结合效率会有所下降,这时才需要进行再生处理。因此,并不是每次纯化后都需要进行再生,而是根据使用次数和结合效率来判断是否需要再生。
镍柱纯化蛋白
为什么加pmsf和dtt
答:
PMSF是
蛋白
酶抑制剂,目的是未了防止蛋白降解。DTT是还原剂,目的是为了防止半胱氨酸形成二硫键,造成蛋白聚集。不过
镍柱纯化
时如果有DTT,可能会造成柱上的镍离子被还原。
纯化蛋白
用的
镍柱
为什么用百分之20的乙醇保存?用无水乙醇保存有什么影响...
答:
百分之20的乙醇保存
镍柱
是为了防止柱子长时间不用长菌。不能用无水乙醇保存,无水乙醇含量太高,进了柱子会对填料造成影响,可能会降低柱效。
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