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IPTG诱导蛋白表达的最佳条件
IPTG诱导
BL(DE3)/BL(DE3)plysS
蛋白表达的最佳温度,时间
,IPTG的浓度...
答:
一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的
IPTG
(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据
诱导蛋白
大小、性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻找合适诱导时间,如果不想这么麻烦,直接过夜诱导。诱...
如何通过调节
IPTG的
浓度和温度来控制
蛋白质表达
速度,从而提高蛋白的可溶 ...
答:
IPTG一般浓度在0.1-1M之间
可以按梯度试不同的浓度 温度一般在18(这是我做过最低的温度 貌似16也可以试)-37之间 如果目前蛋白溶解度太低 可以试试偏低浓度的IPTG和偏低的温度 让蛋白表达的慢一点 而且低温有利于蛋白形成较稳定的正常构象 总之就是要这两个条件相结合 找到最佳搭配 ...
为什么加了
IPTG诱导
重组
蛋白
后细菌的生长速度明显减慢?
答:
有些药物可以抑制细菌的生长,但不见得在蛋白层次明显表现出来。
你可以尝试从mRNA水平进行考虑或者转录因子角度进行考虑
。mRNA水平的,你可以做mRNA表达谱芯片来看看你的mRNA表达的情况,相信在IPTG的作用下与没有IPTG组对比的mRNA表达是有比较大的差异的。但蛋白的表达就不见得了。
关于原核
表达
问题
答:
诱导的起始浓度是要测定的,一般都是1.0
,诱导时间是取样以后根据诱导蛋白表达情况测定的,没有统一安排。一般还要做IPTG浓度梯度,温度梯度寻找最佳条件。
【菌周刊】简析大肠杆菌BL21及其衍生菌株
答:
对于星耀小TIP的注意事项,
包括了确保感受态细胞在冰中缓慢融化
,加入目的DNA应在融化后的短时间内进行,避免过长的冰中存放时间以防止转化效率降低;操作过程中应轻柔,避免使用强力吸打;对于高浓度的质粒,可相应减少最终用于涂板的菌量;诱导时可选择IPTG浓度,但最佳诱导条件(时间、温度、IPTG浓度)...
蛋白表达
实验的整个流程是什么?
答:
诱导表达
:通过添加合适的诱导剂,如异丙基β-D-硫代半乳糖苷
IPTG
,诱导目标基因的表达。注意选择适当的诱导时间和
诱导条件
,以确保
最佳的表达
水平。细胞收获:在诱导期结束后,收获表达细胞。对于真核细胞,通常需要先裂解细胞膜来释放目标
蛋白
。而对于细菌细胞,可以通过离心或超声等方法裂解细胞壁。蛋白...
BL21(DE3)
表达的最佳条件
是什么
答:
BL21(DE3)pLysS对λDE3(1)是溶源性的。λDE3含有T7噬菌体基因I,编码的T7 RNA聚合酶受lac UV5启动子的控制。BL21(DE3)pLysS含有pLysS质粒,他携带编码T7溶菌酶基因。在T7启动子控制下,T7溶菌酶降低靶基因的背景表达但并不干扰由
IPTG诱导的表达
水平。
亮氨酸拉链的转录因子
答:
并将其克隆到Escherichia coli BL21,讨论了此亮氨酸拉链
蛋白的表达条件
.在蛋白质的小量表达试验中,重组子Escherichia coli BL21于5 mL含有50 μg/mL氨苄青霉素和34 μg/mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期,加入不同浓度的
IPTG
,继续培养以
诱导蛋白质的表达
,在不同的时间( 如:诱导前,诱导2,...
氨苄抗性的大肠杆菌为什么发酵不好
表达
答:
为了获得h-bFGF高效
表达的最佳条件
,进行了摇瓶试验。在
IPTG诱导
作用下,h-bFGF可以分泌到胞浆中,采用连续流加葡萄糖的高密度分批发酵工艺,经11h发酵可以获得菌体光密度值(OD值)达38,产量达200mg/L和h-bFGF。
如何提高外源基因片段在原核细胞中的
表达
量
答:
构建载体的时候,考虑用具有强启动子的载体并且能够在大肠杆菌中表达重组蛋白的载体,比如pET系列的载体,转入的宿主菌要求是表达形的,比如BL21等。在表达过程中,注意摸索
诱导
剂
IPTG的
量、诱导时间及培养温度。多次摸索就可以找到一个
最佳
方案,因为
蛋白表达
是一个载体+宿主菌+培养
条件
的优化组合的选取。你...
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