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pcr载体
pcr
结果测序是不是都需要构建
载体
答:
PCR
的结果并不一定需要构建到
载体
上才能测序,一般来说也可以回收PCR片段后根据已知序列直接合成相应引物进行测序,只是这样做有一点不好,因为测序引物结合的部分及下游50~100bp左右的片段可能会由于测序的原因而不是很准,故还需要设计反向引物往回测序;而构建到载体上后测序,用载体的通用测序引物测序就不...
什么是T-克隆
载体
和U-克隆载体?
答:
用于TA克隆的
载体
被称为T-克隆载体,它的出现使
PCR
产物的克隆更加简便快捷。如pGEM-3Z4Z载体由pUC1819增加了一些功能片段改造而来,大小为2.74kb。与pUC1819相比,在多克隆位点的两端添加了噬菌体的转录启动子,如Sp6和T7噬菌体的启动子(link:xlinkhref=i010801图4-8link),便于克隆片段的测序。...
纯干货:目的基因
PCR
扩增——构
载体
第一步
答:
在
PCR
完成后,产物的检测至关重要,通过1%琼脂糖凝胶电泳,可以清晰看到扩增产物的绿色条带,通过这种方法确定PCR成功。在点样和电泳过程中,技巧性地操作移液枪,如平稳、缓慢地插入,确保样品无气泡,是保证电泳效果的关键。最后,观察电泳结果并思考引物设计对构建
载体
的影响,这将有助于深化对PCR的理解...
PCR
产物片段链接到T
载体
上后,PCR片段是否会出现两种连接方向
答:
PCR
产物片段链接到T
载体
上后,PCR片段是会出现两种连接方向。如果用1%的琼脂糖电泳30min,主带(超螺旋的闭环质粒dna)会在3kb-2kbmarker之间,如果是单酶切产物,则应该在3.5kb的marker附近。要连接到载体上,形成带有PCR目标片段的质粒,将这个质粒导入受体菌,才能检测这个片段的活性、作用等等。摘要...
pcr
产物只能与t
载体
连接吗
答:
不是。如果
PCR
末端加A的可以用T
载体
连接,
pcr
产物是平端,可以用平端载体连接,但效率低。PCR是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。
连
载体
以后酶切为什么只有载体
答:
连
载体PCR
扩增出来的是混合物,酶切回收后基本是纯的目的片段,留下的都是载体。
进行
PCR
扩增时为什么要将目的基因连到
载体
上?直接对其进行扩增不行吗...
答:
其实都可以,只不过直接扩增仅仅是目的基因,扩增后还是要连接到
载体
上,我认为连接到载体上后再扩增,只是为了方便吧.
做菌落
PCR
时的上下游引物是谁的?是目的片段PCR是的上下游引物还是
载体
...
答:
都可以。最排除背景的方法是用交叉引物做菌P,也就是上游引物是
载体
引物,下游引物是目的基因下游引物,或者上游引物是目的基因上游引物,下游引物是载体下游引物,这样可以最大限度排除背景,只要能扩出来的基本上就可以肯定是重组子了
为什么
PCR
产物需经纯化后再与
载体
连接?
答:
因为
PCR
扩增出来的除了你的目的片段之后还有其它的引物,模板,还有游离的dNTP等其它的杂质。如果这些不去除的话肯定会影响你后面的连接反应,使你的连接反应受这些影响而效率不高,或者连接不上。如果是单一的PCR目的片段,那么连接效率就大大提高。
PCR
扩增时,引物是否插入
载体
后再复制?
答:
pcr
是体外扩增,没有
载体
,你以为是在细胞里面呀,
PCR
体系温度变性时94℃,40秒蛋白质早就变性了,PCR是引物直接开始和模板DNA结合,在taq酶作用下延伸。我这两天正在做这个实验呢。没错!
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