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做原核表达的目的
目的
基因在真核生物中
表达
都需要整合到受体细胞的染色体上,而
原核
细...
答:
首先
原核
细胞没有真正的细胞核所以没有染色体,它的DNA主要存在拟核区域。所以
目的
基因在真原核生物中
表达
只需要导到细胞中就可以了 其次,大肠杆菌可以产生胰岛素,但是由于它只有核糖体这种细胞器,没有内质网和高尔基体加工,所以它形成的胰岛素是没有生物活性的 ...
如何做好
原核表达
答:
答:①DNA和染色体水平上的调控:基因的拷贝数扩增或丢失和基因重排,DNA修饰,在染色体上的位置,染色体结构(包括染色质、异染色质、核小体)都可影响基因
表达
.②转录水平上的调控:转录起始的控制和延伸的弱化对mRNA前体的水平都会产生影响.③转录后RNA加工过程和运送中的调控:真核基因转录出的mRNA前体,...
原核表达
常见问题(三)蛋白纯化后续的问题分析
答:
1.
目的
蛋白纯化浓缩之后,目的蛋白条带周围出现杂带,据推测可能是插入目的基因后,外源基因的
表达
刺激大肠杆菌产生了宿主蛋白酶,对异源蛋白进行降解的产物。样品缓冲液有相同的 pH 和离子强度。离子交换纯化是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不一样达到分离目的的一种蛋白纯化...
原核
共
表达
质粒是什么意思
答:
有些
原核
生物拥有独立于核DNA的质粒DNA,但不是所有的质粒DNA都可以表达,
原核
共表达质粒就是指那些可以同核DNA一起
表达的
质粒DNA。
求
原核表达
详细步骤
答:
基本步骤:
目的
基因的扩增、载体与目的基因双酶切、电泳、割胶回收、目的基因与载体的连接反应、重组体筛选、验证重组体、转化入大肠杆菌进行
表达
。问题在于:目的基因如何获取,扩增策略的决定,表达载体的选择,双酶切选择哪一对限制性内切酶,如何筛选重组体等等。
为什么将
目的
基因导入微生物细胞的受体细胞是
原核
答:
原核
生物(如大肠杆菌)作为受体细胞的优势主要有:(1)易杀灭,不会对外界环境造成生物污染;(2)质粒结构带有自己的启动子和调控序列,便于外源重组DNA分子的导入和
表达
,对细胞本身基因组不会有影响;(3)代时短,生长条件易于满足,便于快速筛选克隆子以及扩大培养或发酵;(4)能使重组DNA分子在其...
原核
生物中
表达
真核蛋白应该注意什么问题
答:
因为
原核
生物缺乏翻译后的修饰,所以
表达的
真核蛋白和真核中表达有所差异,可能没有生物学活性等,但是要是做免疫原应该没问题;基因需为cDNA,不能含有内含子,原核细胞不能对mRNA进行剪切;要分析DNA序列信息,分析其密码子,由于
原核
与真核生物的密码子偏好性不同,所以有时可能会出现稀有密码子而...
原核表达
未诱导与诱导差别不大什么原因
答:
蛋白直接没有诱导出来。导结果差别不大的话,是蛋白直接没有诱导出来,换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看。广义的
原核表达
,是指发生在原核生物内的基因表达。狭义的原核表达,常出现于生物工程中。是指通过基因克隆技术,将外源
目的
基因,通过构建表达载体并导入表达菌株的方法,使...
过
表达
质粒和敲低质粒有什么区别
答:
这是真核细胞表达载体保证
目的
基因稳定
表达的
因素之一。原核过表达质粒:启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列,它是基派皮因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子,基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子,因此
原核表达
载体所用的启动子必须是原核启动子。
基因工程为什么从真核细胞中提取
目的
基因导入
原核
细胞
答:
真核细胞的基因常包括内含子和外显子,只有在特定的细胞(应该是基因来源的细胞)中才可以完成正确的RNA剪切,然后
表达
.因而,如要设计表达真核细胞中的某段基因,常根据蛋白质序列推出DNA序列,然后设计引物,表达.
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