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原核表达系统的表达载体
...说明外源基因可以在哪几种宿主细胞中的大规模
表达
,各有什么特点...
答:
(1)外源基因在大肠杆菌中
的表达
,特点:①大肠杆菌的结构简单;②生理代谢途径较为清楚;③并且易于遗传操作和大规模发酵培养。因此,大肠杆菌已成为高效表达异源蛋白质最常用的
原核表达系统
。(2)外源基因在酵母中的表达,特点:①基因组简单,易于分析操作;②具有真核生物特有的蛋自质翻译后修饰加工体系,...
质粒图谱怎么看
答:
而配合扩增和酶切的话,插入片段是允许有3`末端的冗余。为了可以应付3`末端的冗余碱基,在多克隆位点序列后,会有译码的终止TAA密码,即使插入的片段使得3`末端产生了移码突变,照样能使
表达
的蛋白正常终止掉(在酵母双杂的AD质粒中,由于插入的是随机cDNA,所以AD
的载体
上会常见这样的结构)。
木霉
表达系统
答:
但是仍然还有很多具体的细节仍在推测阶段,有些重要阶段分泌我们知道得较少,很多重要的蛋白酶的功能仍在探究中,目前较低的木霉转化率和表达外源蛋白的不稳定性仍是制约木霉大规模应用的主要因素。但是,木霉
的表达
系统可以克服在
原核表达系统
中无法进行特定翻译后修饰的缺陷,而且比酿酒酵母具有更高的分泌外源蛋白的能力...
蛋白
表达系统的
酵母表达系统
答:
因此,一般不用酿酒酵母做重组蛋白质表达的宿主菌二,甲醇营养型酵母
表达系统
:甲醇酵母表达系统是目前应用最广泛的酵母表达系统。目前甲醇酵母主要有汉森酵母属(Hansenula),毕赤酵母属(Pichia),球拟酵母属(Torulopsis)等,并以毕赤酵母属(Pichia)应用最多。甲醇酵母
的表达载体
为整合型质粒,载体中含有与...
典型生物药物的一般制造流程是什么
答:
通过研究发现主要的基因表达调控元件有:启动子、增强子、终止子、衰减子、绝缘子和反义子1.6.3 外源基因
表达系统
外源基因表达系统泛指目的基因与
表达载体
重组后,导入合适的受体细胞,并能在其中有效
的表达
,产生目的基因产物(目的蛋白)。由此可知,外源基因表达系统由基因表达载体和相应的受体细胞两部分组成。基因表达系统有原...
为什么说真核细胞的基因含有不
表达
的DNA片段,不能直接用于基因的扩增...
答:
真核生物的基因分编码区和非编码区,而非编码区又有外显子和内含子,内含子是不能编码为蛋白质的,所以不能直接用于基因的扩增。人工合成基因是有目的的合成的,不含内含子,再说你要内含子也没有用,不是吗/
基因
表达载体
上的复制原点有特异性吗
答:
质粒通常只在原核细胞复制,少数人工构建
的表达
T抗原的真核细胞,比如293T也支持质粒复制。由于原核和真核细胞需要的启动子不相同,所以用于真核表达的质粒和用于
原核表达
的质粒有不同的启动子等表达元件。
真核生物基因在
原核
生物里
表达
应如何操作
答:
通过基因工程手段,用特定的限制性内切酶,切割目的基因和质粒载体,然后用DNA连接酶连接,用氯化钙或者电刺激处理
原核
生物细胞,把带有目的基因
的载体
导入原核生物即可.
基因
表达载体
的构建需要哪些工具酶
答:
在构建基因
表达载体
时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。过程:首先要用一定的限制酶切割质粒,使...
外源基因连接T
载体
导入到大肠杆菌,那么外源基因能在大肠杆菌中
表达
吗...
答:
可以的,因为它上面有启动子T7/SP6(哪个我忘记了)。但是T载体一般不用做表达载体,因为它是靠T-A连接的(T载体上含多个T,PCR产物含多聚A),读码框未必正确,所以一般是用作中间过渡的载体,后续要把这段基因切下来(你的扩增引物上需要设计酶切位点,保证读码框正确),换到专门
的表达载体
去...
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