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原核表达系统的表达载体
如何使基因在
原核
生物中
表达
答:
1.获取目的基因:最简单的是直接从cDNA文库找,不然就要自己用mRNA逆转录出cDNA,然后PCR,电泳检测,回收。2.酶切和连接:找一个质粒
载体
,根据载体的说明书选择内切酶,一般是双酶切。把载体和你的目的片段用一样的酶切了,然后混合了连接。3、转化:找一种工程菌,把它弄成感受态,把你连接好了...
DAP-seq(DNA亲和纯化测序)技术常见问题(input是什么)
答:
8. 做这个蛋白表达的时候,使用的什么表达系统?优先使用真核表达系统进行蛋白表达,如果真核表达系统不能表达成功的话可以沟通换用
原核表达系统
。9. 植物组织样本取样的时期部位有什么要求?植物组织样本取样的时期和部位是您根据自己的研究需求确定,不同组织和时期DNA的修饰不同,可能会影响蛋白和DNA的...
...已知序列的小分子抗菌肽,论述如何采用生物工程的技术进行
表达
...
答:
3、引物设计出来以后抽提总RNA,用RT-PCR对抗菌肽对应的基因进行扩增。4、测序,将目的基因连接到T
载体
上,转化入克隆菌(如TG1),蓝白斑筛选,用PCR和酶切鉴定重组结果,获得重组质粒后,以此为模板进行测序,验证目的基因的准确性。5、选择适合
的表达
系统和适合的载体。可采用大肠杆菌
原核表达系统
,将...
基因重组蛋白?
答:
重组疫苗和基因疫苗(核酸疫苗)的区别是什么?重组疫苗是应用基因工程技术制成,如把编码HBSAg基因插入酵母菌基因组,制成基因重组乙肝疫苗。重组疫苗:通过基因重组技术生产的疫苗 DNA疫苗:通过导入外源DNA表达蛋白的疫苗基因疫苗将编码外源性抗原的基因插入到含真
核表达系统的载体
上,然后直接导入人或动物体内...
融合蛋白的融合蛋白简介
答:
融合蛋白 - 技术概况 融合蛋白技术是为获得大量标准融合蛋白而进行的有目的性的基因融合和蛋白表达方法。利用融合蛋白技术,可构建和表达具有多种功能的新型目的蛋白。 融合基因可在原核细胞(如大肠杆菌) 也可在真核细胞中进行表达。
原核表达系统的
特点是时程短,费用低,是科研中的主要工具。其缺点是真...
真核或
原核
基因的启动子能不能被转录
答:
不能。启动子(Promoter) 位于结构基因上游,就是连接在基因5’端上游的DNA序列,其长度从100 bp到200 bp不等,是转录起始时RNA聚合酶识别、结合和启动转录有关的一段特殊DNA顺序,其本身并不被转录。
pET-his
载体
为什么必须在BL21(DE3)菌,而不能在DH5α中
表达
?
答:
BL21(DE3)菌株是在野生型BL21菌株的基础上,整合了一段来源于λ 噬菌体的DE3片段,该片段中包含了编码T7RNA聚合酶的基因,能够在IPTG或乳糖诱导下表达T7RNA聚合酶,而该聚合酶又能进一步转录T7启动子,从而启动
载体
上外源基因
的表达
。因此说,理论上只要整合了DE3片段的大肠杆菌(比如BL21(DE3)或JM...
一文解读:质粒
载体
及各个组成元件
答:
在质粒的元件设计中,pcDNA3.1图谱为我们揭示了关键区域:复制起点、筛选标记(如AmpR、KanR,抗生素抗性基因用于阳性克隆的筛选)和多克隆位点。穿梭质粒(如pcDNA3.1)的独特性在于它具备两个复制起点,支持在
原核
和真核细胞中
的表达
。除了这些,还有转录调控和翻译表达元件、蛋白标签等特殊元件,例如,...
生物基因工程探针怎么制作出来的?
答:
(1)从目标DNA中选取所需的序列,如启动子、编码区、基因家族等;(2)将所选DNA序列插入到质粒
载体
中,如pBluescript II SK+, pET-30a等;(3)将质粒转化到大肠杆菌等适宜的宿主细胞中,利用蛋白质
表达系统表达
出所需要的基因产物。优点:
原核表达
法高效,适用于大规模制备探针,表达产品也具有...
...构建克隆载体与
表达载体
重组子的筛选 诱导表达以及如何检测和纯化...
答:
2、设计引物的时候你也顺带设计了酶切,那么就可以通过PCR扩增你的目的基因,然后通过双酶切获得大量目的基因。后续试验要根据你需要此基因做什么研究来看了,不同研究选用不同
的表达载体
,不同实验需求是不同的,这个建议你跟你们实验室的其他人商量或者询问老师,希望这些能帮到你!
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