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原核表达载体的特点
基因
表达载体
上的复制原点有特异性吗
答:
质粒通常只在原核细胞复制,少数人工构建的表达T抗原的真核细胞,比如293T也支持质粒复制。由于原核和真核细胞需要的启动子不相同,所以用于真核表达的质粒和用于
原核表达的
质粒有不同的启动子等表达元件。
真核基因在
原核
系统
表达的
主要步骤
答:
理论上不同来源的基因在不同受体中
表达的
机理都是基本相同的,所部同的是合成的蛋白质在修饰和折叠上有所不同,因此表达效果也不尽相同。从技术上常用的流程大概就是:①目的基因连接上
载体
,②将载体(通常为质粒)转染细菌,③培养并富集目的细胞,④检验表达效率。(各个流程几乎都有很良好的试剂盒...
高中生物为什么说真核细胞的基因因为内含
答:
在
原核
细胞中的编码区内不含有外显子和内含子。即编码蛋白质的序列被不能编码蛋白质的序列分隔开来,成为一种断列的形式,而非编码区即是RNA聚合酶的结合位点和结束位点。原核细胞的基因结构,非编码区,外显子和内含子的区别是在原核细胞中外显子能被转录出来。 2,非编码区;
特点
.构建
表达载体
...
引物 基因 构建克隆载体与
表达载体
重组子的筛选 诱导表达以及如何检 ...
答:
2、设计引物的时候你也顺带设计了酶切,那么就可以通过PCR扩增你的目的基因,然后通过双酶切获得大量目的基因。后续试验要根据你需要此基因做什么研究来看了,不同研究选用不同的
表达载体
,不同实验需求是不同的,这个建议你跟你们实验室的其他人商量或者询问老师,希望这些能帮到你!
原核表达
产物的鉴定方法
答:
大体分为一下几步:1.设计目的片段引物(含限制性酶切位点,要求:
表达载体
上有而目的片段上没有的酶切位点)2.PCR扩增片段3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接,通过蓝白斑筛选,提质粒并酶切鉴定;将正确连接的克隆载体重组质粒酶切,回收目的片段4.目的片段与表达载体连接5.转化到DH5a等克隆...
真核或
原核
基因的启动子能不能被转录
答:
不能。启动子(Promoter) 位于结构基因上游,就是连接在基因5’端上游的DNA序列,其长度从100 bp到200 bp不等,是转录起始时RNA聚合酶识别、结合和启动转录有关的一段特殊DNA顺序,其本身并不被转录。
真核基因如何在
原核
生物中
表达
具体步骤
答:
那先要获取
表达
出此蛋白的基因(目的基因)然后将此基因整合进
原核
生物的DNA中 若要检测目的基因是否表达,可以将一段可以表达出抗药性的基因与目的基因一同转入,之后可将抗生素加入被植入目的基因的原核生物培养基中,则存活下来的个体就能将该蛋白合成 ...
基因工程中重组质粒怎么形成
答:
二、 大肠杆菌质粒
载体
1.pBR322质粒质粒pBR322是经人工构建的一种较为理想的大肠杆菌质粒载体,亦是应用最为广泛的克隆载体,利用pBR322曾克隆到多种基因,虽然现在已有多种具有更优良
特性
的新型克隆载体逐渐代替了pBR322在基因克隆中地位,但pBR322仍是人工构建的具有几乎所有的理想特性的基因克隆载体之一。pBR322质粒...
求
原核表达
详细步骤
答:
说起来容易做起来就要摸索了,基本步骤:目的基因的扩增→载体与目的基因双酶切→电泳→割胶回收→目的基因与载体的连接反应→重组体筛选→验证重组体→转化入大肠杆菌进行表达。问题在于:目的基因如何获取,扩增策略的决定,
表达载体的
选择,双酶切选择哪一对限制性内切酶,如何筛选重组体等等。
lac, pro基因的作用
答:
启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列,它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子,基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子,因此
原核表达载体
所用的启动子必须是原核启动子。原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成,对mRNA的合成极为...
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