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大肠杆菌表达载体的优缺点
基因工程常用
载体
和其相应宿主细胞
答:
.pUC 系列质粒
载体
:
大肠杆菌
λ噬菌体:大肠杆菌 BAC(大肠杆菌人工染色体):大肠杆菌 YAC(酵母菌人工染色体):酵母菌 pRS 系列酵母质粒载体:酵母菌 pcDNA 系列质粒:哺乳动物细胞(动物/大肠杆菌穿梭质粒)pEGFP 系列质粒:哺乳动物细胞(动物/大肠杆菌穿梭质粒)....
为什么细菌基因组dna不能用作克隆
载体
?
答:
因为细菌基因组DNA里面是拟核作为
载体
,拟核本身就是个很大的环状DNA分子插入后不容易寻找,而且有的缺乏标记基因无法证明是否能够
表达
。用它作为载体也无法在体内进行复制,不能整合到宿主细胞的DNA中。最后就是由于在提取时长链的分子容易断裂可能导致目的基因的损坏。
噬菌体克隆
载体
是怎样构成的?
答:
λ-DNA作为
载体的
优点:①λ-DNA可在体外包装成噬菌体颗粒,能高效转染
大肠杆菌
;②λ-DNA载体的装载能力最大为25kb,超过质粒的装载量;③重组λ-DNA分子的提取和筛选较为方便;④λ-DNA载体适合克隆和扩增外源DNA片段,但不适合
表达
外源基因。(3)λ噬菌体载体的主要应用:λ噬菌体载体属于克隆载体,...
为什么只有使用受体生物自身基因的启动子才比较有利于基因的
表达
答:
(2)将cDNA前接上在
大肠杆菌
中可以适用的启动子,另外加上抗四环素的基因,构建成一个
表达载体
. (3)将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中,然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌.如果表达载体未进入大肠杆菌中,大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉;如果培养基上长出大肠杆菌菌落,则表明β-珠蛋白基因已进入其中...
如何构建一个基因的过
表达载体
答:
3、将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处,首先碱基互补配对结合,两个黏性末端吻合在一起,碱基之间形成氢键。4、再加入适量DNA连接酶,催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键,从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来,形成一个重组DNA分子。如人的胰岛素基因就是通过这种方法与
大肠杆菌
中的质粒DNA分子结合,形成...
生物技术工程 论文
答:
俄罗斯科学家构建了以假单胞菌为
载体的
表达系统来生产基因工程干扰素.与传统的
大肠杆菌表达
系统相比其培养周期短,细胞易于破碎便于提取。随着基因重组技术的不断发展,一些研究人员对干扰素基因进行改造,构建靶向干扰素基因及
表达载体
。夏小兵等利用限制性内切酶分别从含有抗乙型肝炎S抗原(HbSAg)人源单链抗体与人干扰素α...
在用
表达载体
转化
大肠杆菌
时,常用什么处理大肠杆菌?
答:
用钙离子处理
大肠杆菌
,使细胞处于一种容易吸收周围环境中DNA的生理状态(使细胞膜的通透性增加),这种大肠杆菌成为感受态细胞.
如何以
大肠杆菌
质粒DNA为
载体
克隆一个编码蛋白的基因,并使之在大肠杆菌...
答:
一般程序如下: 获得目的基因-准备
表达载体
-将目的基因插入表达载体中 (测序验证)-转化表达宿主菌-诱导靶蛋白的表达-表达蛋白的分析-扩增、 纯化、进一步检测。 [主要试剂 主要试剂] 主要试剂 1、LB 培养基。 2、 100mM IPTG (异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2.38g IPTG 溶于100ml ddH2O ...
为什么测序正确,在
大肠杆菌
中诱导却不
表达
?谢谢
答:
可能是包涵体形成了,不是不
表达
,而是蛋白不溶解!
怎么利用选择培养基鉴别是质粒质粒
答:
A物质便会被β-半乳糖苷酶水解成蓝色,
大肠杆菌
将形成蓝色菌落;如果lacZ基因中插入了外源基因,带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能
表达
β-半乳糖苷酶,培养基中的A物质不会被水解成蓝色,大肠杆菌将形成白色菌落.如果长出蓝色菌落,说明自连的运
载体
PUC118质粒已转入受体菌,但目的基因没有接入运载体或...
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