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怎么给目的蛋白加上标签
如何
将包裹在内部的his tag暴露出来
答:
这样的话当然不会被镍柱捕获了.比较严重的情况就是包涵体的形成,是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞破碎液上清和沉淀中
目的蛋白
的分布情况.如果形成包涵体那你就需要先使蛋白质尽可能的溶解了,可以加入一些变性剂,比如尿素.当
标签
暴露出来之后就比较容易挂柱了.
BL21保存的质粒会使histag
标签
丢失吗?
答:
中表达,然后再提取纯化
蛋白
后在兔子或老鼠中获得抗体?这中间有个问题,
怎么加上
His-tag(组氨酸
标签
)?是直接设计引物引进 His-tag(组氨酸标签),还是按照有些人说的转到PET-30a这样还有 His-tag(组氨酸标签)的载体上获得?请问有没有同学做过加 His-tag(组氨酸标签)的实验啊,请指教啊!
多克隆位点表达
蛋白
吗
答:
从
标签
到你插入
目的
片段的第一个酶切位点处 是表达的 如果你插入的目的片段3‘端带终止密码子 那么表达的部分就是从标签到你的目的片段3’端 如果你的目的片段不带终止子 一般载体上多克隆位点后面都有终止密码子也就是说多克隆位点的那一段序列是表达的 具体表达多长 要看终止密码子在哪了 不同...
蛋白
表达不出来是
怎么
回事?
答:
更换载体;第四步:更换载体还不表达,选择GST、MBP、SUMO、GB1等助溶
标签
融合表达。另外,当
目的蛋白
太小或太大时可能都不易表达:小肽易被降解;太长例如大的膜蛋白等表达量往往也很难优化。当然,表达温度以及诱导时间也会对蛋白的可溶表达有一定影响~ 但一般不会导致0和1的差别~祝实验顺利~
...融合表达可以在设计引物时同时加HIS tag 和
蛋白
Linker
答:
不知道你要问什么。这个挺容易做到的。就是把his taq加到设计的引物上,做2轮PCR就能把两段基因连在一起了。
falg
标签
western blot 抗体为什么可以与变性的
蛋白
结合
答:
Flag
标签
融合
蛋白
一般都是非变性表达的 做WB的话,不管是否是变性蛋白,和SDS结合后都会打开原有的结构暴露出N端或者C端的标签,这样就有了抗原决定簇,抗Flag标签的抗体会和抗原决定簇起免疫反应。所以说作为抗原,是否变性都没关系的。
用镍柱纯化带his
标签
的
蛋白
,蛋白过镍柱时忘记加wash buffer就加elute bu...
答:
意思是没有先用wash buffer清洗镍柱,就直接用elute buffer洗脱了么。这样的话洗脱效果会比较差一些,洗脱的
蛋白
纯度会明显降低。虽然his
标签
的蛋白结合镍柱时特异性非常高,但因为种种原因总会有一些杂蛋白非特异性吸附在柱子上,所以要先用wash buffer冲洗掉这部分杂蛋白,再用elute buffer洗脱,已达到最...
目的蛋白
中TF
标签怎么
切除
答:
用DNA酶切割啊
DNA与
蛋白质
相互作用的研究方法有哪些
答:
拉下实验又叫做蛋白质体外结合实验(binding assay in vitro),是一种在试管中检测蛋白质之间相互作用的方法。其基本原理是将某种小肽(例如生物素、6-His
标签
以及谷胱甘肽转移酶等)的编码基因与诱饵蛋白的编码基因重组,表达为融合蛋白。分离纯化融合蛋白并与磁珠结合,使之固相化之后,再与表达
目的蛋白
的细胞提取物混合保...
...翻译是从载体上的起始密码子开始还是从
目的蛋白上
的开始?_百度...
答:
当然是从载体上已有的融合蛋白开始,你的
目的蛋白
是在Trx和His-tag后面的
棣栭〉
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