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怎么给目的蛋白加上标签
蛋白质
的提取中
如何
确定
目的蛋白
?
答:
如果蛋白有纯化
标签
并且是过表达的话就比较容易判断,一般纯化过程中通过SDS电泳不同组分确定
目的蛋白
。如果没有纯化标签,一般是通过SDS电泳或者双向电泳和蛋白活性实验(如果蛋白有生物活性,比如酶),或者通过western blot来确定目的蛋白。如果再想精确的话,就是N端测序或者做肽谱。
求助
蛋白
表达中的his
标签
的作用
答:
his
标签蛋白
就是:六
个
组氨酸。一般存在于重组蛋白氮端或碳端,便于纯化该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的
目的
。也就是在表达载体上面,特别加六个组氨酸的碱基序列,目的就是纯化。………更多具体材料请参考:蛋白表达 http://product.bio...
...自己的
目的
基因蛋白的分子量一样,还是得
加上标签蛋白
的分子量?_百 ...
答:
原核表达的
蛋白
是没有修饰作用的,一般而言电泳表观分子量应该与蛋白分子量+
标签
的大小一致。但有时候会有一定的迁移,比如用pet28a表达的蛋白进行电泳时表观分子量会比蛋白分子量+标签大5kD左右。不过通过对比未诱导的阴性对照能很清楚地看出来自己表达的蛋白。
His –taq是什么,
怎么
利用它纯化
蛋白
。
答:
组氨酸
标签
,由六
个
连续的组氨酸构成.组氨酸的咪唑基能与一些阳离子,如镍,可逆的结合,所以在加有his-tag的蛋白纯化时可以利用这个结合特性来分离纯化
目的蛋白
.
原核表达
目的蛋白
不表达
怎么
办
答:
使用gene designer (DNA tool 2.0)非常经典 不过你的
蛋白
不表达,很可能是形成了包涵体,这个是一个非常大的问题,更换可溶性表达
标签
是一
个
方法 建议你去查一查文献
GST
标签蛋白
纯化策略
答:
样品上样前应进行离心和过滤,以防止堵塞层析柱。蛋白纯化过程包括柱平衡、上样、洗涤和洗脱。洗脱过程中需保持适宜的流速,以获得高纯度的
目的蛋白
。GST
标签
的去除方法有柱上酶切和洗脱后酶切两种。推荐柱上酶切,因为它能有效去除杂质,使目的蛋白具有更高的纯度。使用PreScission™、Thrombin或...
重组
蛋白
的组氨酸
标签
怎么
去掉
答:
凝血酶和肠激酶)都是可以切掉的,当然,个人建议你用肠激酶,因为肠激酶酶切位点更贴近你的
目的蛋白
,而用凝血酶的话还有一个S tag。如果你在构建载体的时候,下游引物没有加终止子,那么你的蛋白的N端也会有一个His Tag,这时候你需要用TAGZyme了,这个酶专一性去除his tag的。
...blot, 检测不到含FLAG
标签
的
目的蛋白
,你觉得是为什么呢?
答:
这个Flag
标签
抗体能检测到其他带Flag标签的
蛋白
吗?例如空载对照。如果空载也不行,那基本抗体就歇了。如果有,就要看Flag标签是不是正确表达了,如果表达不正确也会影响到检测的。
我问师兄
怎么
纯化包涵体,他说……
答:
将
蛋白加上标签
后,其可以与连接有配体的层析介质特异性结合,以此分离纯化。在众多的纯化标签中,有两个标签可以用来在变性条件下纯化蛋白——His-tag 和 Strep-tag 。这两种标签都属于重组蛋白表达中常用的标签,至于两者之间的对比,在这里给大家列出一张表格以供参考:(图片来源:哺乳动物细胞表达的...
产品
蛋白质
含量0.3g/100ml营养
标签
应该
如何
标示是否强制标0
答:
是否强制得看什么产品,除了豁免产品都是强制标注的,能量、
蛋白质
、脂肪、碳水化合物、钠都是强制项目,标注0.3g,具体格式参考一下其他产品营养
标签
,是表格形式,没法形容在这
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