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无需诱导原核载体
原核
生物基因表达调控的4种类型是哪4种?
答:
原核
基因表达调控主要发生在转录水平上,根据调控机制
不
同可分为:①负控
诱导
系统:阻遏蛋白与效应物结合而不结合与操纵基因上,使得结构基因得以转录;②负控阻遏系统:阻遏蛋白与效应物结合后结合于操纵基因上,使得结构基因不能转录。③正控诱导系统:效应物使激活蛋白处于活性状态促进结构基因转录;④正...
原核
表达在16度应
诱导
多长时间
答:
低温诱导一般需要的时间都比较长,一般如果能够诱导出来的话大概是24小时。如果是PET系统的话,有些蛋白是16度
诱导不
出来的,你得自己重新摸一下诱导的温度。
原核
表达菌液的OD值过高再去
诱导
蛋白可以吗
答:
一般都是在对数生长期进行
诱导
表达。OD值过高,细菌可能已经老化,诱导也表达量较少甚至
不
表达
构建的
原核
表达
载体
,测序也正确,为什么有的就
不
表达目的蛋白?
答:
先测序看看序列是
不
是三的倍数,保证是连接到
载体
上,并且载体也是转入表达菌的,不行的话,通常做法是调节
诱导
剂浓度,诱导时间,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个蛋白始终没有表达,没办法放弃了。
转基因动物的转移方法
答:
基因显微注射法的特点是外源基因的导入整合效率较高,
不需载体
,直接转移目的基因,目的基因的长度可达lOOkb(10万个碱基对)。它可直接获得纯系,所以实验周期短。但需要贵重精密仪器,技术操作难度大,并且外源基因的整合位点和整合的拷贝数都无法控制,易造成宿主动物基因组的插入突变,引起相应的性状改变,重则致死。反转录...
关于
原核
表达问题
答:
OD600只能看出菌体浓度,一般超过1.0才够,我们的经验是500ml的菌液在锥形瓶里摇到发白,手掌放在瓶底下从上面看
不
清手指了,就OK了,但关键还是要看你的目的蛋白浓度,条带会变成很明显的一大团。
诱导
的起始浓度是要测定的,一般都是1.0,诱导时间是取样以后根据诱导蛋白表达情况测定的,没有统一...
目的基因与标记基因产物
答:
当人们想利用某些细菌产生某些物质时,会先提取目的基因,然后让目的基因与运
载体
结合,再将目的基因导入受体细胞,最后培养细胞进行表达.标记基因就是在导入受体细胞时导入进取的人类的已知作用的基因,目的是为检测目的基因是否成功导入.由于一般都是有"鸟枪法"导入的目的基因,所以成功率并
不
是很高,目的基因的...
什么是转基因
答:
显微注射法的优点是导入的外源基因片段可长达50 kb,且
无需载体
,外源基因在宿主染色体上的整合率相对较高。其不足之处是外源基因的整合是随机的,因而难以控制其整合率;再者,对外源基因能否稳定整合于受体基因组的检测,必须等到子一代个体出生后经过选择才能确定,不利于在生育期长、产仔少的大家畜中应用。 2.胚胎...
实验专栏 | 大肠杆菌
原核
表达的整体思路
答:
通过测序验证后,将构建的
载体
转入表达菌株中。接着,挑取几个单克隆进行小量表达,通过SDS-PAGE或Western Blot方法分析表达情况。在此基础上,优化表达条件,包括
诱导
时机、诱导剂的量、诱导时间以及培养温度等,以获得最佳的表达效果。如果实验出现
不
表达的情况,需仔细分析问题所在,如蛋白毒性或本底表达等...
原核
表达 目的蛋白
不
表达怎么办
答:
使用gene designer (DNA tool 2.0)非常经典 不过你的蛋白不表达,很可能是形成了包涵体,这个是一个非常大的问题,更换可溶性表达标签是一个方法 建议你去查一查文献
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