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设计一个蛋白原核表达方案
IPTG 诱导
蛋白表达
的原理及方法步骤
答:
1、外源基因的诱导表达
(1) 用适当的限制性内切核酸酶消化载体DNA和目的基因。(2) 按连接步骤连接目的基因和载体,并转化到相应的宿主菌。(3) 筛选出含重组子的转化菌落,提取质粒DNA作限制性内切核酸酶图谱,DNA序列测定,确定无误后进行下一步。(4) 如果表达载体的原核启动子为PL启动子,则在30...
pull down实验原理是什么?
答:
Pull down实验方案设计:
1、构建含His或GST标签的诱饵蛋白原核表达载体
。2、原核表达诱饵蛋白(我们采用自诱导培养基培养细菌,能有效降低包涵体的形成)。3、细菌裂解液过柱,带标签的诱饵蛋白被固相化亲和配基捕获,产生“次级亲和支持物”。4、待测样品裂解液过柱孵育,与诱饵蛋白互作的蛋白被“次级亲和支...
蛋白表达
用哪种表达方式比较好呢?常用的表达方式是哪种呢
答:
1
、宿主。
表达蛋白
的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表达蛋白的种类也不相同。2、载体。载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同,分为
原核
(细菌)表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体...
这是一道考研题:现需要得到某个基因的
蛋白表达
产物,用来制备该基因的多...
答:
下面是通过
原核表达
系统得到基因表达的产物以及制备多克隆抗体的一种方法:
1
.得到目的基因:
设计
引物(引物上带有酶切位点)→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上 2.得到目的
蛋白
:将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系...
请问:真核生物的基因在
原核
生物基因进行
表达
时的注意事项 有哪些?_百度...
答:
1
,选对插入序列,克隆构建好后,测序,看你插入到
原核
载体中的序列是否正确、完整,有无移码和各种突变,起始密码子和终止密码是否正确;2,所选的
表达
体系是否合适,有时,你需要表达的基因可能来源于真核生物的线粒体或叶绿体,其中是否有稀有密码子,否则会影响表达效率,表达的
蛋白
是可溶的还是包涵体...
真核生物的基因在
原核
生物基因进行
表达
时的注意事项 有哪些
答:
1
,选对插入序列,克隆构建好后,测序,看你插入到
原核
载体中的序列是否正确、完整,有无移码和各种突变,起始密码子和终止密码是否正确;2,所选的
表达
体系是否合适,有时,你需要表达的基因可能来源于真核生物的线粒体或叶绿体,其中是否有稀有密码子,否则会影响表达效率,表达的
蛋白
是可溶的还是包涵体,是否需要...
多顺反子
表达
元件——一次满足你N个愿望
答:
一、多顺反子:真核生物的创新解决
方案
常规基因
表达
往往依赖单一质粒,但当需要同时表达多个基因时,问题就浮现了。混合法虽然理论上可行,但随机性高,且不能保证每个细胞都能精确接收。这时,多顺反子元件登场,它像
一个
巧妙的组合拳,解决了启动子大小、强弱平衡以及顺反子顺序表达的挑战。多顺反子...
如何提高外源基因片段在
原核
细胞中的
表达
量
答:
在表达过程中,注意摸索诱导剂IPTG的量、诱导时间及培养温度。多次摸索就可以找到
一个
最佳
方案
,因为
蛋白表达
是一个载体+宿主菌+培养条件的优化组合的选取。你有可能还要考虑蛋白是否会形成包涵体,用什么样的柱子纯化。本人觉得主要是在诱导和温度培养是影响比较大,多设几组对照看哪一组表达量高。祝你...
原核表达
产物纯化后有一条非目的
蛋白
条带,怎么办
答:
如果有抗体,做个western blot判断下,是杂带还是降解片段;如果是杂带,优先考虑优化你使用的纯化
方案
,如Ni柱,考虑延长washing buffer的时间和提高咪唑浓度,使用分辨率更好的填料;还去不掉,考虑用2步或3步纯化,比如用离子交换、凝胶过滤。个人见解,仅供参考,祝一切愉快!
...关于一种基因工程药物的研制
方案
,包括它的制备工艺等
答:
1.收获量大,更有效服务社会。2.生产效率更高3.进一步改良药理活性,例:
蛋白质
工程4.有利于获得新药:筛选新型化合物5..?基因工程 (genetic engineering):有意识地把
一个
生物体中有用的目的基因转入另一个生物体中,使后者获得新的遗传性状或
表达
所需要的产物。稀少珍贵的蛋白质药物1982年,美国食品与药物管理局批准...
1
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3
4
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