如题所述
谈谈个人见解:
1,选对插入序列,克隆构建好后,测序,看你插入到原核载体中的序列是否正确、完整,有无移码和各种突变,起始密码子和终止密码是否正确;
2,所选的表达体系是否合适,有时,你需要表达的基因可能来源于真核生物的线粒体或叶绿体,其中是否有稀有密码子,否则会影响表达效率,表达的蛋白是可溶的还是包涵体,是否需要分泌型表达;
3,原核表达的蛋白是没有糖基化修饰的,如果你的目的蛋白本身有糖基化,而且是后续研究必须的,就不适合用原核表达;
4,既然是原核表达,大多是要纯化的,就要考虑你的纯化方案,以及选择合适的标签和标签的添加位置;
纯属个人见解,欢迎大家继续讨论和补充,祝愉快!
1,选对插入序列,克隆构建好后,测序,看你插入到原核载体中的序列是否正确、完整,有无移码和各种突变,起始密码子和终止密码是否正确;
2,所选的表达体系是否合适,有时,你需要表达的基因可能来源于真核生物的线粒体或叶绿体,其中是否有稀有密码子,否则会影响表达效率,表达的蛋白是可溶的还是包涵体,是否需要分泌型表达;
3,原核表达的蛋白是没有糖基化修饰的,如果你的目的蛋白本身有糖基化,而且是后续研究必须的,就不适合用原核表达;
4,既然是原核表达,大多是要纯化的,就要考虑你的纯化方案,以及选择合适的标签和标签的添加位置;
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第1个回答 2012-04-19
1 要用原核表达载体。
2 要用强启动子。
别的没啥
2 要用强启动子。
别的没啥
第2个回答 2012-04-19
你是问基金组构建吗?应该是内切酶最重要了,然后是温度、PH等理化条件。步骤好像是质粒选择、内切酶的选择、酶切、连接酶的连接、基因的表达了吧。