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真核表达蛋白纯化
DAP-seq(DNA亲和
纯化
测序)技术常见问题(input是什么)
答:
有两种情况的样品是不能做DAP-seq 实验的,一种情况是没有参考基因组,另一种情况是转录因子不能在体外表达出来,除此之外,我们会做可行性分析报告供您参考。7. 包含重复吗?包含两个技术重复。8. 做这个
蛋白表达
的时候,使用的什么表达系统?优先使用
真核表达
系统进行蛋白表达,如果真核表达系统不能...
真核
原
核表达
系统的优缺点?
答:
原核的:周期短,
蛋白表达
量高,但是如果用来表达真核的蛋白,活性可能受到影响。真核的:蛋白表达活性一般较好,但是周期相对较长,一般是首先考虑原核表达,无效表达或者表达出的蛋白活性太低的时候才选用真核。但
真核表达
比如酵母表达系统,有时候融合
蛋白蛋白
糖基化可能会改变蛋白的分子量,进而改变其一些重要的生物学功能...
相分离重点
答:
推测
蛋白质
中的IDR以分析其发生相分离的能力 另外需要注意的是,蛋白质的翻译后修饰(PTM)对于相分离是非常重要的,在细菌
表达纯化
出来的蛋白一般翻译后修饰非常少, 在真核细胞纯化的蛋白一般具有较好的翻译后修饰,建议
真核表达
的蛋白在做实验之前,最好先使用质谱等方式鉴定其翻译后修饰,以保证实验的...
怎样从总rna中进行mrna的分离和
纯化
答:
真核
生物的mRNA分子是单顺反子,是编码
蛋白质
的基因转录产物。真核生物的所有蛋白质归根到底都是mRNA的翻译产物,因此,高质量mRNA的分离
纯化
是克隆基因、提高cDNA文库构建效率的决定性因素。哺乳动物平均每个细胞含有约1x10-5?g RNA,理论上认为每克细胞可分离出5~10mg RNA。其中 rRNA为75%~ 85%,tRNA占10%~16...
真核
过
表达
质粒,原核过表达质粒的区别~急求~~
答:
一、指代不同 1、
真核
过表达质粒:真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体,具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP
蛋白表达
基因。2、原核过表达质粒:能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。二、特性不同 1、真核过表达质粒:该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时...
蛋白质
融合标签
答:
MBP(麦芽糖结合蛋白)标签,是
蛋白质纯化
最常用的标签之一,也是大标签,分子量大小在40kDa以上,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加目标蛋白在细菌中的溶解性,尤其是
真核
蛋白,也可以增加融合
蛋白表达
量。MBP可以和交联淀粉亲和树脂结合,结合的融合蛋白可用10-20mM麦芽糖在温和条件下洗脱,得到高纯度、高浓度目标蛋白。
如何提高
蛋白质
活性
答:
第一,要尽量保持产物的天然结构,避免使用过于剧烈的手段
纯化
,如避免使用有机溶剂,SDS,尿素等使
蛋白质
变性的物质,尽量在低温下进行分离纯化,也要避免产生过多的泡末,避免过度搅拌。第二,要尽量提高其纯度。第三,注意有些蛋白质需要激活剂,如金属离子等。网站:http://www.51protocol.com/ ,...
原
核表达
详细步骤
答:
原核与真核间的抉择:原核表达以其遗传清晰、成本效益高和
蛋白质
稳定性强而闻名,但缺乏后翻译修饰。相比之下,
真核表达
能提供蛋白修饰的机会,但复杂性和成本增加。在构建重组体时,引物设计是关键,需确保读码准确,同时加入酶切位点,遵循引物设计的严格规则。诱导表达的调音师:原核表达可通过诱导进行...
蛋白
析出问题
答:
看起来是构象不正确,可能是折叠或修饰的问题。如果只要求可溶,
纯化
后稀释一下,也许就不沉淀了。也可以试试加一些稳定剂,如甘油,DTT,分子伴侣等。如果要正确折叠的,就比较麻烦,可以用
真核表达
系统试试。Thermo有一种用人细胞裂解液表达的系统,自称修饰系统很好。
融合
蛋白
融合蛋白简介
答:
融合
蛋白
技术主要包括原核和
真核表达
系统。原核系统,如大肠杆菌,优点在于表达快速、成本低廉,但可能面临真核蛋白修饰不足、蛋白沉淀为包涵体等问题。相比之下,真核表达系统如酵母或哺乳动物细胞,能提供更完善的蛋白后修饰,且易于转染,产物分泌方便,提纯简单,但成本相对较高。构建融合蛋白的基本步骤...
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