比如我需要过表达人恶性黑色素瘤细胞中的某蛋白,能在大肠杆菌中扩增后,转染到人恶性黑色素瘤细胞中,那么我需要的质粒是真核还是原核?
一、指代不同
1、真核过表达质粒:真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体,具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因。
2、原核过表达质粒:能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。
二、特性不同
1、真核过表达质粒:该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞,这是真核细胞表达载体保证目的基因稳定表达的因素之一。
2、原核过表达质粒:启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列,它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子,基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子,因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。
三、载体构建不同
1、真核过表达质粒:,由238个氨基酸组成,分子量约为27Kd。GFPGFP在包括热、极端PH和化学变性剂等苛刻条件下都很稳定,用甲醛固定后会持续发出荧光,但在还原环境下荧光会很快熄灭。
2、原核过表达质粒:以含目的基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。
参考资料来源:百度百科-原核表达载体
参考资料来源:百度百科-真核细胞表达载体
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考
第1个回答 推荐于2017-11-25
所有的质粒都是在细菌(原核)中构建和扩增的,但要在真核细胞中表达需要真核表达载体,要在原核细胞中表达需要原核表达载体。这两种载体主要的区别是启动子和polyA加尾信号的不同,一个适合在原核细胞中表达,一个适合在真核细胞中表达。
你需要哪种质粒取决于你最终需要在哪种细胞中表达目的蛋白,如果你要直接在大肠杆菌中表达目的蛋白,然后用纯化的蛋白去处理黑色素瘤细胞,那你就应该用原核载体;如果你要在大肠杆菌中构建质粒,然后把质粒转染到哺乳细胞中表达目的蛋白,你就应该用真核载体。但无论哪种载体,构建和扩增质粒都是在大肠杆菌中进行的。
至于抗性基因,因为所有质粒都要在大肠杆菌中扩增,所以都带有大肠杆菌的某种耐药基因。至于真核耐药基因则不一定,原核表达载体肯定不需要真核耐药基因,真核表达载体则有些有真核耐药基因,有些没有。另外,原核细胞的kana耐药基因和真核细胞的neo耐药基因是同一个基因。本回答被提问者和网友采纳
你需要哪种质粒取决于你最终需要在哪种细胞中表达目的蛋白,如果你要直接在大肠杆菌中表达目的蛋白,然后用纯化的蛋白去处理黑色素瘤细胞,那你就应该用原核载体;如果你要在大肠杆菌中构建质粒,然后把质粒转染到哺乳细胞中表达目的蛋白,你就应该用真核载体。但无论哪种载体,构建和扩增质粒都是在大肠杆菌中进行的。
至于抗性基因,因为所有质粒都要在大肠杆菌中扩增,所以都带有大肠杆菌的某种耐药基因。至于真核耐药基因则不一定,原核表达载体肯定不需要真核耐药基因,真核表达载体则有些有真核耐药基因,有些没有。另外,原核细胞的kana耐药基因和真核细胞的neo耐药基因是同一个基因。本回答被提问者和网友采纳
第2个回答 2013-04-27
质粒只是小型环状DNA分子,你指的真核、原核具体是什么?追问
比如我要构建过表达质粒载体,质粒带的抗性有些是原核,有的是真核,不懂。。