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诱导表达蛋白上清和沉淀都有
如何降低
表达
产物对大肠杆菌的毒性
答:
如何降低表达产物对大肠杆菌的毒性 1、在摇瓶发酵试验中,在较高的温度下(37、30度)
诱导表达
目的基因时,目的
蛋白
基本以包涵体的形式存在,胞外
上清
中可溶性的目的蛋白很少,这时菌浓正常,OD600大约有15左右。而在低温(25度)诱导时,目的蛋白大部分依然以包涵体的形式存在,此时胞外上清中可溶部分有...
硫酸铵分级
沉淀蛋白质
的原理和方法是什么啊?
答:
沉淀,再加到浓度50%时球
蛋白沉淀
,饱和时 清蛋白 沉淀…一,基本原理 硫酸铵沉淀 法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离,是 免疫球蛋白 分离的常用方法。高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可
与蛋白质
竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的 水化膜 ,降低其...
我要用western检测一种细胞系中分泌
蛋白
的
表达
,eg:细胞因子,是检测培 ...
答:
培养2-3天收集培养液离心,浓缩
上清
至原体积的1/30-1/10,然后做western检测。如果还检测不出来就用上述液做个免疫
沉淀
,然后做western。但这样就误差太大,基本看不出来变化。所以建议:(1)以细胞内的蛋白做,刺激时间不要过长。(2)用
表达
量与此
蛋白有
直线相关的其他蛋白来代替,比如其信号通路...
硫酸铵分级
沉淀
的原理【硫酸铵分级沉淀原理
及
实验方案】
答:
4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌 6 小时或搅拌过夜( 4 ° C ),使
蛋白质
充分
沉淀
。(三)透析 1.蛋白质溶液 10 000 ′ g 离心 30 min ( 4 ° C )。弃
上清
保留沉淀;2.将沉淀溶于少量( 10-20ml ) PBS -0.2g /L 叠氮钠中。沉淀溶解后放入透析袋对 PBS -0.2g /L 叠氮钠透析 ...
纯化回收的
上清蛋白
析出还有活性吗用
答:
这个不好说的 首先要确认析出的
蛋白
是否可以复溶,如果不能复溶就肯定不会有活性。如果可以复溶,那么还是具有有活性的可能。然后,析出的原因也较多,如果是因为盐浓度较高导致的析出,重新复溶后具有活性的可能性较大,如果是因为pH原因造成的
沉淀
析出,即使能够复溶有活性的可能性也比较小了。另外...
三氯乙酸
沉淀蛋白质
是否可逆
答:
加3倍体积原样品体积的丙酮(室温),样品在室温下静置约10min,使TCA+DOC溶于丙酮。室温离心15min,其时,
沉淀
物的大小和物理特性类似于一点灰尘。约10ug或更多一点
的蛋白质
即可看见。有时,会得到白色的盐类(如KCl等)沉淀物。用极精细的巴氏吸管移去
上清
。沉淀物置冰上干燥10 min(敞开1.5-ml...
如何排除DNA溶液中,RNA和
蛋白质
的干扰
答:
6. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和
蛋白质
可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇
沉淀
水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。7. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去
上清
。8. 用75%乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml...
哺乳动物细胞
蛋白表达
纯化服务实验报告案例
答:
本案例基于pAZV5分泌
表达
体系,使用基因合成的方法构建pAZV5表达载体,瞬时转染HEK293悬浮细胞,通过SDS-PAGE和 Western Blot检测
蛋白
的表达情况,扩大培养收集细胞
上清
并通过Ni柱的亲和纯化获得目的蛋白。一、实验设计 我们分析客户提供的Target-Gene序列,整个蛋白序列呈亲水性,自身不带信号肽序列,因此...
染色质免疫共
沉淀
(ChIP)是怎么回事?
答:
真核生物的基因组DNA以染色质的形式存在。因此,研究
蛋白质与
DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因
表达
机制的基本途径。染色质免疫
沉淀
技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究体内DNA
与蛋白质
相互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其...
有人知道金属硫
蛋白
吗?
答:
七、补锌剂 严格地讲,我们生产的MT应该称为Zn-MT(即锌金属硫
蛋白
),是结合Zn的MT,所以有人把MT也称为生物锌,一个分子的MT能结合5-7个锌原子。如5mg的MT中的含锌量为5×1016个。锌为人体必需的一种元素,俗称“生命之光”。锌的缺乏会引起多种机能障碍:如生长不良及生殖器官发育受损、...
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