做完凝胶电泳,叫凝胶块溶解在Buffer中时,不是已经回收到了扩增产物吗?为什么下一步还需要再与载体进行连接,这样做的目的也是为了获得更加纯化的扩增产物?
不是为了纯化PCR产物。
你要知道整个分子克隆操作是要干什么,一般来说,我们觉得某一片段有用,才会PCR获取它,然后怎么用呢?当然要连接到载体上,形成带有PCR目标片段的质粒,将这个质粒导入受体菌,才能检测这个片段的活性、作用等等,只有一段PCR产物,是没有生物活性的,没有什么用。
你要知道整个分子克隆操作是要干什么,一般来说,我们觉得某一片段有用,才会PCR获取它,然后怎么用呢?当然要连接到载体上,形成带有PCR目标片段的质粒,将这个质粒导入受体菌,才能检测这个片段的活性、作用等等,只有一段PCR产物,是没有生物活性的,没有什么用。
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第1个回答 2019-10-19
那得看你用多少浓度的胶跑,如果用1%的琼脂糖电泳30min,你的主带(超螺旋的闭环质粒dna)会在3kb-2kbmarker之间,如果是单酶切产物,则应该在3.5kb的marker附近。