如题所述
按基因工程定义:在某些生长条件下,大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子包涵体,它们致密地集聚在细胞内,或被膜包裹或形成无膜裸露结构,这种水不溶性的结构称为包涵体。
简单的说,就是外源基因在大肠杆菌胞内表达的过程中,因为某些错误的折叠,形成的不溶的无活性的固体颗粒。形成的原因很复杂,比如表达量过高,无法糖基化,组成中含有较多的半胱氨酸之类的氨基酸,离子键疏水键共价键共同的化学作用等。
提高可溶表达的方法也很多
1,降低诱导温度,比如16度诱导。绝大多数蛋白质在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达。
2,降低诱导剂的用量,比如0.1mM IPTG诱导。甚至更极端的可以不加诱导剂,形成泄漏表达。这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达。
3,更换不同的表达载体,表达菌株。比如个人感觉pET28比pET21,Rosetta的菌株比BL21(DE3)更容易可溶表达。
4,更换表达系统增加信号肽,外源基因导入酵母系统或者哺乳动物细胞,只要是能分泌表达一定可溶性表达。
简单的说,就是外源基因在大肠杆菌胞内表达的过程中,因为某些错误的折叠,形成的不溶的无活性的固体颗粒。形成的原因很复杂,比如表达量过高,无法糖基化,组成中含有较多的半胱氨酸之类的氨基酸,离子键疏水键共价键共同的化学作用等。
提高可溶表达的方法也很多
1,降低诱导温度,比如16度诱导。绝大多数蛋白质在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达。
2,降低诱导剂的用量,比如0.1mM IPTG诱导。甚至更极端的可以不加诱导剂,形成泄漏表达。这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达。
3,更换不同的表达载体,表达菌株。比如个人感觉pET28比pET21,Rosetta的菌株比BL21(DE3)更容易可溶表达。
4,更换表达系统增加信号肽,外源基因导入酵母系统或者哺乳动物细胞,只要是能分泌表达一定可溶性表达。
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