使用pET-28a载体,大肠杆菌表达外源基因,可是出来两条带,挨得很紧,并且都能够挂Ni柱,不知道为什么,从开始表达就出现,一直到纯化,都存在着
两条带从SDS-PAGE胶上可以看出相差大约2KD左右,都能够和镍柱结合,包涵体处理后也是很浓的两条带。二聚体的可能性不大,如果是二聚体,应该分子量差两倍左右的吧。
是不是形成二聚体了?或目的蛋白内部有某个酶的位点,被水解掉一段
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第1个回答 2008-10-08
我觉得你可以根据分子量大小来过下柱子吧,选择分子量合适的。
但是为什么出现了2条带,我也不是很清楚。不正确表达的情况有很多。建议你上网多查查,百度知道里问不出来什么的。
但是为什么出现了2条带,我也不是很清楚。不正确表达的情况有很多。建议你上网多查查,百度知道里问不出来什么的。
第2个回答 2008-10-08
两个分子量大概差多少?