最近一直在做原核蛋白表达纯化实验,蛋白纯化完总是不可溶,形成包涵体,有没有什么好的解决方法,谢谢~
原核蛋白表达纯化是很容易形成包涵体的,在现阶段可以采用俩种手段,一是预防,二是复性。
先说“预防”,预防就是指在蛋白过表达形成包涵体前,对表达环境进行优化的一些手段,来降低重组蛋白合成的速率。例如:密码子优化,表达温度的选择,与分子伴侣或折叠酶共表达等等;而蛋白质的复性则是指:在变性条件不剧烈,变性蛋白质内部结构变化不大时,除去变性因素,在适当条件下变性蛋白质可恢复其天然构象和生物活性的方法。
这俩种方法说起来都比较麻烦,涉及的知识点和概念比较多,建议先看一些资料比较好。
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