做了近一个月的蛋白表达，一直表达不出来，请大家帮我分析一下。
载体pET29b, 目的基因长度726bp，GC%含量：66.53%，蛋白241aa。
做的是原核基因的His 融合蛋白表达；
一开始用得是表达菌株是BL21(DE3)和BL21(DE3) pLysS, 第一次电泳预期片段处看到了一条高表达的条带，但是以后再重复就没有了，western也没有；所以怀疑第一次是假阳性；
因GC含量高，疑为稀有密码子问题，换了BL21 CodonPlus(DE3)-RP,可是做电泳，western都还是没有东西
我实在想不出来什么原因，请高手指点迷津！
不胜感激！
是不是西游密码子问题啊，换个菌株试试，我有ROSETTA-GAMI。我用32+载体，表达量还可以。可以交流。zhangyingbiao@126.com
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第1个回答 2009-01-02
做表达我们很少用29，都是用28，32，30等等
