如题所述
可溶性蛋白质含量的测定:
进行测定时,加Folin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定,但上述还原反应只在pH=10的情况下发生,当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前,还原反应即能发生。
考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(1~100μg),蛋白质与色素结合物在595nM波长下的光吸收与蛋白质含量成正比,故可用于蛋白质的定量测定。
管号123456蛋白质标准液(ml)00.200.400.600.801.00蒸馏水(ml)1.000.800.600.400.200蛋白质含量(μg)020406080100在每支试管中加入5Ml考马斯亮蓝G-250溶液,
盖塞,反转混合数次,放置2Min后,用1CM光径比色杯在595nM下比色。以蛋白质浓度为横坐标,以吸光值为纵坐标绘制标准曲线。
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