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可溶性蛋白测定实验步骤
可溶性蛋白质测定
答:
在进行
蛋白质
含量
测定
前,需先绘制标准曲线,取6支具塞试管,配制含0-100μg/mL的牛血清蛋白质液,每支试管加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液,放置2分钟后,用1cm光径比色杯在595nm下比色,绘制标准曲线。接着,吸取样品提取液1.0mL,放入具塞试管中,加入5mL考马斯亮蓝G-250溶液,充分混合后放置2...
可溶性蛋白
质含量的
测定
答:
可溶性蛋白
质含量的
测定
:进行测定时,加Folin—酚试剂时要特别小心,因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定,但上述还原反应只在pH=10的情况下发生,当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时,必须立即混匀,以便在磷钼酸—磷钨酸试剂 被破坏之前,还原反应即能发生。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红...
可溶性蛋白
质含量的
测定
答:
考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blueG-250)
测定蛋白质
含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm在一定蛋白质浓度范围内(1-1000μg)),蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量...
测定
植物体内
可溶性蛋白
含量有什么意义和用途
答:
(1)样品的提取:称取鲜样0.5g,用5ml蒸馏水或缓冲液研磨提取。取1.0ml(视
蛋白质
含量适当稀释)样液加入试管中,然后重复
步骤
2的(2)、(3)、(4),以标准曲线中的0管为空白,
测定
吸光值。(2)根据吸光值查标准曲线,求出比色液中的蛋白质含量。三、结果计算 样品中蛋白的含量(mg/g...
如何对细胞内
可溶性蛋白
质进行蛋白组分析
答:
裂解细胞,高速离心去除沉淀,取上清跑等电聚焦-SDS双向电泳,银染。然后切割样点,做质谱分析
。或者直接去细胞裂解上清液做高通量质谱分析。
设计性
实验
:植物组织内
可溶性蛋白质
的提取和含量
测定
答:
组成和规格:无色透明的提取试剂50 ml或100 ml。贮存: 4°C,密封避光1年。用途: 提取多种植物组织和细胞的
可溶性
和疏水性
蛋白
。如苹果、花生、土豆、烟叶、菠菜、梅花等。操作
步骤
:1. 组织匀浆,必须充分匀浆,此步骤非常关键:(1) 冻存组织匀浆:预先将研钵置于-20°C ~-70°C冰箱内冷冻。
什么是
可溶性蛋白
质?
测定
它的含量跟植物盐胁迫有什么关系
答:
回答:是指能溶于水的
蛋白质
;反比;该生物或细胞的代谢程度何功能复杂度;
可溶
:大多数的蛋白酶、激素,不可溶:大多数的组织蛋白;下面的与上面的有些重复,不说了。
可溶性蛋白测定
的问题
答:
这个不用担心吧,我
测定
植物
可溶性蛋白
的时候,切取组织--低温研磨--低温下离心,其他物质和蛋白质的分子量不同,离心(我当时用的是3600转/分钟,4摄氏度)就行了。
可溶性
表达的
蛋白
如何纯化?纯化后如何除咪唑?
答:
1,破细胞,高速离心收上清收集上清(同时平衡好柱子);2,既然你是His-tag,用Ni-NTA之类的柱子,两次上柱,buffer平衡;3,低浓度咪唑(5mM)洗5-10柱体积,以洗去杂
蛋白
;4,过梯度咪唑(10-500MM),用紫外
检测
仪监测280nm,收下每个峰;5,用峰液跑SDS-PAGE,看哪个峰的蛋白浓度和纯度最...
关于
可溶性蛋白质
的提取和鉴定
答:
按照蛋白的提取方式提取就行了。一般有些
步骤
都是不变的,破碎--离心--提取 提取的话看你要提取的蛋白的性质进行选择。有电泳,盐析,HPLC。提取后纯化该蛋白,可以采用凝胶柱进行分离,然后进行SDS-page,确定分子量大小,还可以进行蛋白测序。然后可以通过X光衍射确定蛋白结构。具体
蛋白质
生物功能
测定
法...
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