请问下大家：我将一个210bp的序列构建在pET-23d载体上转化菌株E.coli BL21希望过量表达这个载体上的蛋白。但我用IPTG诱导3h，做了SDS－PAGE发现没有表达，这该怎么办啊？ 是不是这个蛋白太小没法表达呢？有没有更适合的载体和宿主菌呢？ 谢谢大家
首先你的蛋白偏小，不容易表达，而且如果你的SDS-PAGE浓度以及电泳时间掌握不好即使表达了也可能看不到。
第二，不是什么蛋白都能原核表达，比如跨膜蛋白经常无法表达，看看你的蛋白又没有跨膜区。或者也有可能蛋白不稳定，很容易降解。
总之，蛋白表达没有通用的好方法，只有不断模索，比如换载体，换条件等等。你的问题又太笼统，很难判断。
第二，不是什么蛋白都能原核表达，比如跨膜蛋白经常无法表达，看看你的蛋白又没有跨膜区。或者也有可能蛋白不稳定，很容易降解。
总之，蛋白表达没有通用的好方法，只有不断模索，比如换载体，换条件等等。你的问题又太笼统，很难判断。
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第1个回答 2007-02-02
你的基因大小是很合适的。注意培养基，要用LB培养基，不可以含糖，还有就是你的基因和乳糖操纵子的promotor是否配套？最重要的是在生长过程中是不是把质粒丢了?可以试试pExSecⅠ载体。上有卡那霉素抗性基因，培养时可加卡那霉素终浓度1mg/ml防止质粒丢失。
第2个回答 2007-02-01
哇，你什么专业啊 ？
第3个回答 2007-02-06
.
第4个回答 2007-02-02
蛋白偏小
