我想表达一个蛋白,质粒是PET-32a,表达菌为BL21,测序后没有碱基缺失,诱导后跑SDS-PAGE后发现条带跟PET-32a空质粒表达后跑的条带似乎没有区别,感觉蛋白没有表达出来似的?
1 2 3 4 M 5 6 7 8 9
1为未诱导表达的,2-8为诱导2-8h的,9为PET-32a诱导表达的5h的,IPTG终溶度为1mmol/L.
最后9空质粒为什么多一条带?另外,你的蛋白如果有的话,大概是多大?和哪条marker相对?追问
marker红色下来第3条是35,我的蛋白大概为36.我的想法空质粒的那条可能是只含his标签的蛋白
追答从这个图来看,你的蛋白表达量不高,但不能说肯定不表达。你用his的纯化kit少量纯化后再跑一下,不用过柱子,就在1.5ml的管子里纯化一下,然后再跑电泳看看。
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