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IPTG诱导蛋白表达低怎么办
如何通过调节
IPTG的
浓度和温度来控制
蛋白质表达
速度,从而提高蛋白的可溶 ...
答:
IPTG
一般浓度在0.1-1M之间 可以按梯度试不同的浓度 温度一般在18(这是我做过最低的温度 貌似16也可以试)-37之间 如果目前蛋白溶解度太低 可以试试
偏低
浓度的IPTG和偏低的温度 让
蛋白表达
的慢一点 而且低温有利于蛋白形成较稳定的正常构象 总之就是要这两个条件相结合 找到最佳搭配 ...
iptg诱导蛋白
诱导不出来会有哪些原因
答:
一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,
可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件
。二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。
蛋白表达
怎样促进
诱导
到包涵体里面?
答:
提高
IPTG
可能会增加包涵体的
表达
量,可以提高的1mM。提高转速不会有帮助的,而且一般摇床也不可能转太快。提高温度如果不是热
诱导
的
蛋白
可能会降低表达量。如果要增加包涵体的量,可以裂解后加快离心的转速。这样包涵体量肯定会增多。另外即使是上清表达也没有关系,可以裂解后加入尿素变性,这样也算是变性蛋...
为什么
用IPTG诱导蛋白
没
表达
?
答:
质粒先测个序吧,这是基础,不然后面一切都白搭。我以前做个C端myc标签的真核
表达
载体,中间有移码了,但用anti-myc做Western仍能检测到微量的目大小的条带,而将移码缺失补上后,目的条带变强了很多。可能的原因是移码时发生了小比例的 ribosomal frameshift,表达出了类似大小的带myc标签的
蛋白
。而...
诱导
式
IPTG的
浓度应该好多?要试验确定吗
答:
一、需要做实验确定
,诱导时IPTG的浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导。三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候蛋白表达达到最高值,最后收菌后,加上以前的取得样品跑SDS-PAGE胶检验...
IPTG 诱导蛋白表达
的原理及方法步骤
答:
1、
诱导表达
材料 (1) LB(Luria—Bertani)培养基 酵母膏 (Yeast extract) 5g
蛋白
胨 (Peptone) 10g NaCl 10g 琼脂 (Agar) 1-2 蒸馏水 (Distilled water) 1000ml pH 7.0 适用范围:大肠杆菌 (2)
IPTG
储备液:2 g IPTG 溶于 10 mL 蒸馏水中,0.22 μm滤膜过滤除菌,分装成 1mL/份,-...
roseta菌株
诱导表达
,加入
IPTG
后发生菌溶现象,菌液变粘稠清亮,没有表达...
答:
可能是你的菌污染了,加入
IPTG
后菌会发生变化比原来的要清一点,但不会粘稠。你可以换用BL21(DE3 )试一下。只要你的
蛋白
含有的稀有密码子不是很多,BL21 的效果是相同的。
包涵体怎样产生的,怎样提高大肠杆菌中外源
蛋白
可溶性
表达
答:
提高可溶
表达
的方法也很多 1,降低诱导温度,比如16度诱导。绝大多数
蛋白质
在降低诱导温度后可以明显提高可溶表达。2,降低诱导剂的用量,比如0.1mM
IPTG诱导
。甚至更极端的可以不加诱导剂,形成泄漏表达。这种情况下表达出来的蛋白一定是可溶表达。3,更换不同的表达载体,表达菌株。比如个人感觉pET28比...
诱导蛋白表达
为什么od值到0.4才能加诱导剂
答:
一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的
IPTG
(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据
诱导蛋白
大孝性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻。
IPTG的
终浓度要到多大才能起到
诱导
的作用
答:
大部分
蛋白
要到0.5mM/L效果就比较好了,如果是第一次做,可以设一个浓度梯度:0.2、0.5、0.8、1、1.5、2等等尝试一下看看哪个浓度比较好,另外跟
诱导
的时间和温度也有关系,多设几个变量,都尝试一下~~
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