包涵体蛋白纯化?

大肠杆菌中包涵体已经在含8M尿素的tris-hcl中裂解了,后面怎样除去高浓度的尿素,用什么溶液?咋样纯化得出我所需的目的蛋白?望高手指教。

可以先进行蛋白浓缩处理,如果你觉得必要,但我个人在上柱之前从不浓缩,干吗要多一个步骤呢,层析本来就会有浓缩的作用。2. 蛋白浓缩方法在实验室做还是PEG比较简单,只需要一个透析袋就够了。但我个人喜欢超虑,不好意思。不建议用(NH4)2SO4沉淀或丙酮沉淀。3. 不管用哪种方法浓缩,如果浓度一上去蛋白就大量沉淀,那对不起请重新优化你的复性方案。但也请避免过量浓缩蛋白,如果一个蛋白在2mg/ml以下是稳定的,那就千万不要浓缩到3mg/ml。4. 8M尿素一般情况下是不会影响你的挂柱的。5. 用PEG干粉包埋透析袋的方法进行蛋白浓缩的时候,所有的小分子(只要分子量小于透析袋截留分子量的)都可以自由进出。一般实验室我见过的用10KD左右的透析袋比较多,我想你应该也是用这种的,所以请不要用PEG6000的干粉了,你不是在做浓缩,你是在做PEG沉淀,因为你的PEG都跑透析袋里去了。
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