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做原核表达的目的
求助求助啊!!谁知道
做原核表达
为什么要用
目的
基因的序列来分析信号肽吗...
答:
信号肽是一个蛋白在C端或者N端的寡肽链,对蛋白的运输具有导向作用。signal sequence。
如何做好
原核表达
答:
答:①DNA和染色体水平上的调控:基因的拷贝数扩增或丢失和基因重排,DNA修饰,在染色体上的位置,染色体结构(包括染色质、异染色质、核小体)都可影响基因
表达
.②转录水平上的调控:转录起始的控制和延伸的弱化对mRNA前体的水平都会产生影响.③转录后RNA加工过程和运送中的调控:真核基因转录出的mRNA前体,...
原核
生物
表达
系统的构建原则是什么?
答:
原核表达
系统中通常使用的可调控的启动子有lac(乳糖启动子)、trp(色氨酸启动子)、tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子)、lpl (l噬菌体的左向启动子)、t7噬菌体启动子等。(1)lac启动子:它来自大肠杆菌的乳糖操纵子,是dna分子上一段有方向的核苷酸序列,由阻遏蛋白基因(laci)、启动基因(p)、操纵基因(...
原核表达目的
基因需要加起始密码子吗
答:
或者
表达的
蛋白对大肠杆菌宿主菌毒性很大,影响菌的生长,导致菌生长困难、提质粒困难等等,就会先克隆到一个克隆载体上面,做测序确定;然后再克隆到表达载体上.通常来说我不太喜欢做两次克隆,总是酶切转化筛选;我喜欢选控制比较严谨的可调控性
原核表达
载体,比如pET系列的多个载体,直接把
目的
基因克隆上去.
真核生物的基因在
原核
生物基因进行
表达
时的注意事项 有哪些
答:
2,所选的表达体系是否合适,有时,你需要表达的基因可能来源于真核生物的线粒体或叶绿体,其中是否有稀有密码子,否则会影响表达效率,表达的蛋白是可溶的还是包涵体,是否需要分泌型表达;3,
原核表达的
蛋白是没有糖基化修饰的,如果你
的目的
蛋白本身有糖基化,而且是后续研究必须的,就不适合用原核表达;4,...
在做大肠杆菌
原核表达
,验证有
目的
条带,但是大剂量诱导并破碎离心后电...
答:
你这好像不是拖尾,是破碎使得蛋白质破断了,我们这边也有人超声波裂解细胞裂断了,差不多就是这个样子,你最好摸索一个比较好的破碎时间
构建的
原核表达
载体,测序也正确,为什么有的就不
表达目的
蛋白?
答:
先测序看看序列是不是三的倍数,保证是连接到载体上,并且载体也是转入
表达
菌的,不行的话,通常做法是调节诱导剂浓度,诱导时间,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个蛋白始终没有表达,没办法放弃了。
在
做原核表达
时带his组氨酸
的目的
蛋白怎么也结合不上镍柱,为什么?_百度...
答:
这样的话当然不会被镍柱捕获了。比较严重的情况就是包涵体的形成,是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞破碎液上清和沉淀中
目的
蛋白的分布情况。如果形成包涵体那你就需要先使蛋白质尽可能的溶解了,可以加入一些变性剂,比如尿素。当标签暴露出来之后就比较容易挂柱了。
急,如何构建
原核表达
载体
答:
2.PCR扩增片段 3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆载体连接,通过蓝白斑筛选,提质粒并酶切鉴定;将正确连接的克隆载体重组质粒酶切,回收
目的
片段 4.目的片段与
表达
载体连接 5.转化到DH5a等克隆菌株,通过抗生素筛选,鉴定表达重组质粒。6.测序检测 7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株 8.表达 ...
原核表达
系统能用来做免疫共沉淀吗
答:
需要制作标签融合蛋白,以方便洗脱IgG和beads。具体如下:1.制作含标签(如myc)
的目的
蛋白克隆载体。2.用含anti-myc的beads,pull-down目的蛋白。3.最后洗的时候,要有一次用myc的peptide洗脱液进行洗脱beads和anti-myc。4.这时上清就只含有你的目的蛋白,而去除了IgG....
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