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原核表达为什么沉淀的蛋白最高
关于
原核表达
问题
答:
菌浓度OD=0.6-1.0开始诱导,你可以在2h,4h,8h的时候取个样,跑一个PAGE胶考马斯染色看看总的目的蛋白浓度,每个
蛋白表达
速度不同,需要的时间不一样,一般4h就可以了,最好还要做一次超声破碎或者酶解,离心分离以后
沉淀
和上清分别煮样,看你
的蛋白
在上清和沉淀当中的分布,最好是在上清,如果没...
原核蛋白表达
,总是在
沉淀
中,怎么解决
答:
应该是原核表达宿主菌比较准确
原核表达宿主菌之前可以表达蛋白,放一段时间不表达蛋白原因很多 首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等 原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。
蛋白原核表达
答:
Origin:由复制起始位点和相关调控元件组成,pET-28a(+)中的复制子属于松弛型中低拷贝型复制子,目标
蛋白的高表达
会对宿主菌造成较大的压力,所以表达载体的拷贝数通常较低。Kan:编码氨基糖苷磷酸转移酶,使质粒产生卡那霉素抗性,用于筛选培养过程中含有目标质粒的宿主菌。Rop:编码ROP蛋白 ,ROP蛋白是...
原核表达蛋白
与原材料提取蛋白相比
有
何优缺点
答:
缺点:如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控,有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用,过量表达可能导致非生理反应,目的蛋白常以包涵体形式表达,导致产物纯化困难;而且
原核表达
系统翻译后加工修饰体系不完善,表达产物的生物活性较低。
蛋白表达
系统分类
原核蛋白
表达系统既是最常用的...
真核
原核表达
系统的优缺点?
答:
原核的:周期短,
蛋白表达
量高,但是如果用来表达真核
的蛋白
,活性可能受到影响。真核的:蛋白表达活性一般较好,但是周期相对较长,一般是首先考虑
原核表达
,无效表达或者表达出的蛋白活性太低的时候才选用真核。但真核表达比如酵母表达系统,有时候融合
蛋白蛋白
糖基化可能会改变蛋白的分子量,进而改变其一些重要的生物学功能...
如何确定一个
蛋白
选用真核表达还是
原核表达
、
答:
一般真核生物来源
的蛋白
质用真核表达,原核生物来源的用
原核表达
,因为真核生物和原核生物有密码子偏好,比如说同一个氨基酸可以由A和B两种密码子编码,真核生物偏好A,含有A的序列在真核中表达量较高,否则,含有B的序列表达量很低.
在
原核表达
系统中如何分离到有活性
的蛋白
质
答:
1,如果
蛋白
是分泌
表达
,直接分离上清(传统的方法:离心去细胞和细胞碎片→过滤(0.45或0.22nm)→蛋白纯化(蛋白纯化是一个很复杂的过程,这里一笔带过了,电泳,层析,
沉淀
等方法)→获得目的蛋白 2,胞内蛋白,首先裂解细胞(这样细胞内的杂蛋白就
多
了)→离心获上清→沉淀(硫酸铵,出去大部分杂...
试述
原核表达
体系和真核表达体系各自的优、缺点。
答:
【答案】:
原核表达
体系如E.coli是当前采用
最多
的原核表达体系,其优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模生产工艺。其不足之处是由于缺乏转录后加工机制,只能表达克隆的cDNA,不宜表达真核基因组DNA(即含有内含子的DNA);表达的真核蛋白质不能形成适当的折叠或进行糖基化修饰;表达
的蛋白
质常常...
对病毒
蛋白
进行"
原核表达
"的研究目的
答:
PCR扩增后,转到表达载体上导入大肠杆菌,(也就是传说中
原核表达的
意思,大肠杆菌是原核细胞)。让菌来定向的生产这个
蛋白
,表达载体(目的蛋白基因序列存在的能产蛋白的载体)所谓的诱导就是加IPTG一种诱导剂,来诱导细胞产生目的蛋白,没有诱导剂就不能生产。挺通俗的吧,就这些吧,应该能看懂吧。。
在
原核
生物中
表达
真核
蛋白
应注意
什么
问题?
答:
可能没有生物学活性等,但是要是做免疫原应该没问题 2.首先要看其序列信息,分析其密码子,由于
原核
与真核生物的密码子偏好性不同,所以有时可能会出现稀有密码子而影响表达的情况 3.要注意你要
表达蛋白
的大小问题,一般情况下大于70KD
的蛋白
在原核菌种不容易表达或表大量低 ...
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