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原核表达实验步骤
基因工程
表达
出的蛋白质怎么鉴定
答:
用相应的抗体(对抗进行同位素标记)进行抗原——抗体杂交;如果出现杂交带,表明目的基因已形成蛋白质产品。
原核表达
载体的构建要几天
答:
原核表达
载体的构建要7天。根据查询相关资料信息,原核表达载体的构建下载缓慢,内部构成复杂,分三个模块进行逐一完成后才能整合,整个
过程
需要7天。
真核表达系统与
原核表达
系统的异同?
答:
一、真核表达系统与
原核表达
系统的共同点 1、真核与原核细胞结构基因均有调控序列。2、
表达过程
都具有复杂性,表现为多环节。3、表达的时空性,表现为不同发育阶段和不同组织器官上的表达的复杂性。二、真核表达系统与原核表达系统的的区别 1、细胞结构存在着差异 原核细胞细胞器只有核糖体,细胞核没...
阐述
原核
生物基因
表达
调控途径
答:
这个题目在微生物学上是整整一章的内容,所以要想详细叙述太难了,我大概给你列出吧。转录水平调控:1.操纵子的转录调控;2.分解代谢物阻遏调控;3.细菌的应急反应;4.通过σ因子更换的调控;5.信号转导和二组分调节系统;6.噬菌体溶源化和裂解途径的转录调控。转录后调控:1.翻译起始调控;2.mRNA...
基因工程问题,真核基因在
原核
细胞中如何
表达
答:
一、请删去基因中的内含子。这可以通过将该基因的cDNA连接至载体中而解决。二、所用的表达载体中,你所需要表达的基因必须由宿主菌能够使用的原核启动子来启动。一般商业的
原核表达
载体均有这类启动子。三、如果你需要表达的基因与宿主菌的密码子偏好有很大的不同,则需要更改这些密码子一适应宿主菌。
真核基因在
原核
中
表达
需要什么原理
答:
第一,克隆到
原核表达
系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列.因为原核表达系统没有剪切修饰内含子的相关酶系统.第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码子偏好是否存在原核表达系统的稀有密码子.那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈.如果有,点突变之.第三,真核基因可能在
表达过程
中需要有分子...
原核表达
蛋白1l菌液加多少lysis buffer
答:
放时间长了都不太好,建议三五个月复苏一次。蛋白是包涵体形式,主要还是和蛋白的性质有关,虽然还有几种在BL21基础上改造的宿主,但是效果还要因你蛋白的性质而异。建议换换其他
表达
载体,优化诱导条件(试一下低温诱导15度),提高你蛋白可溶部分的比例。包涵体的复性是一个很麻烦的
实验
,每个蛋白的复性...
为什么在做
原核表达
SDS-PAGE时对照的还要做个加诱导剂的呢,那诱导剂...
答:
因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你的目的基因的特异
表达
。如果做目的基因不加诱导剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平。也可以看出诱导剂的作用。我们
实验
室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照。
IPTG诱导蛋
答:
在
原核表达
系统中,如大肠埃希菌(E.coli)中,外源基因的表达通常需要诱导剂的调控。IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)作为常用诱导剂,其诱导蛋白表达的机制和
实验步骤
对于理解这种调控至关重要。原核生物基因常按照功能聚集成操纵子,如乳糖操纵子,它包括Z、Y和A三个结构基因,分别编码β-半乳糖苷酶、通透酶...
为什么常用
原核
细胞做
表达
?
答:
原核生物培养起来很容易!常用的
原核表达
菌体为大肠杆菌,它无处不在,只需一点泡豆芽的水就能生存,所以培养起来很容易!最后只需要将菌体裂解就可以收获大量的表达产物!但真核生物的基因不能用原核细菌表达,否则无活性(真核含内含子且表达蛋白需修饰)!
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