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得到大量原核表达的X蛋白
绿色荧光
蛋白的蛋白
应用
答:
作为一种新型的报告基因,GFP已在生物学的许多研究领域
得到
应用。利用绿色荧光蛋白独特的发光机制,可将GFP作为蛋白质标签(protein tagging),即利用DNA重组技术,将目的基因与GFP基因构成融合基因,转染合适的细胞进行
表达
,然后借助荧光显微镜便可对标记
的蛋白质
进行细胞内活体观察。由于GFP相对较小,只有238个氨基酸,将其与...
绿色荧光
蛋白
基因的重组与
表达
实验流程图
答:
从含GFP基因的载体上酶切下GFP基因,比如pGFP载体,切胶回收GFP基因片段,再同样酶切你的表达载体(根据你想
表达的
物种选择不同载体),把回收的GFP基因同你酶切后纯化的表达载体放到一起,加T4连接酶连接过夜。再转化大肠杆菌。如果只是在大肠杆菌里做
原核表达
,就直接转化
蛋白表达
能力强的大肠杆菌菌株...
JAK2
蛋白
为什么要用昆虫细胞来
表达
?为什么不用元和系统来表达呢?
答:
昆虫细胞
表达蛋白
,其翻译后修饰最接近哺乳动物细胞所
表达的蛋白
,其在结构与功能上也与哺乳动物细胞更接近。相比较哺乳动物细胞表达系统而言,昆虫细胞表达系统具有表达量高(最高为500mg / L)、细胞容易生长(一般不需要二氧化碳培养箱)、易于扩增、实验成本低等优势 。虽然
原核
细胞表达也能对蛋白进行...
诱导
表达蛋白
为什么要使用t4噬菌体的启动子而不用大肠杆菌自己的启动...
答:
原核表达
系统中通常使用的可调控的启动子有Lac(乳糖启动子)、Trp(色氨酸启动子)、Tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子) 、lPL (l噬菌体的左向启动子)、T7噬菌体启动子等。(1)Lac启动子:它来自大肠杆菌的乳糖操纵子,是DNA分子上一段有方向的核苷酸序列,由阻遏
蛋白
基因(LacI)、启动基因(P)、操纵基因...
表达
出来
蛋白质
无活性怎么办
答:
你用的是什么表达系统?你
的蛋白
又是什么蛋白?考察:基因序列是否完整?是否使用的是
原核表达
系统,是的话换用真核表达系统。
表达蛋白
是否产生包涵体?是的话请换用菌株。
多种基因只要不排斥就能合成吗? 比如,合成成功的狮虎兽
答:
不排斥就可以,不过想要不排斥这不可能,为什么构建带HIV
x
FFFD;1 TAT转录因子的穿膜序列(Protein transduction domain,PTD)的pET28a�PTD�Foxp3
原核表达
载体,表达纯化PTD�Foxp3融合
蛋白
,并研究其生物学作用。方法: 利用基因重组技术构建pET28a�PTD�...
...采用哪些策略判断它是否为编码功能
蛋白质
的完整基因
答:
用软件如DNAMAN或者DNASTAR翻译一下,看是否是一个完整的开放阅读狂,中间是不是有突变位点,如果是完整的,而且没有突变位点,一般来说就要进行
蛋白质的原核表达
,看是否有目的带的表达,后面还可以做纯化,测活性等等
影响外源基因
表达的
基因主要有哪些
答:
在保持单个 细胞基因表达水平不变的前提下,提高菌体密度可望提高外源
蛋白质
合成的总量。五、细胞的代谢负荷:外源基因在细菌中高效表达,必然影响宿主的生长和代谢,而细胞代谢的损伤,又必然影响外源基因的表达。合理地调节好宿主细胞的代 谢负荷与外源基因高效
表达的
关系,是提高外源基因表达水平不可缺少的...
细胞中某个基因的RNA表达水平很低,而
蛋白表达
正常,这是什么原因_百度知 ...
答:
这些活跃的DNA首先释放出两种非组
蛋白
,(这两种非组蛋白与染色质结合较松弛),非组蛋白是造成活跃
表达
基因对核算酶高度敏感的因素之一。更多的科学家已经认识到,转录水平调控是大多数功能蛋白编码基因表达调控的主要步骤。关于这一调控机制,现有两种假说。一种假说认为,真核基因与
原核
基因相同,均拥有...
如何提高外源基因在
原核
细胞中的稳定性
答:
提高
表达蛋白的
稳定性。防止其降解
原核
细胞中外源蛋白往往不够稳定,易被蛋白酶降解从而使
蛋白质
产量降低。采取措施是提高目的蛋白的稳定性,减少目标蛋白的降解从而提高外源基因在原核细胞中的稳定性。
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